Microscopio

CELLULE VIVE

La stessa cellula animale

viva (fibroblasto) in coltura

vista (A) con l'ottica normale

in camp0 chiaro); (B) fottica

A) a contrasto di fase

(C)Pottica a contrasto di

interferenza. Questi sistemi

sfruttano differenze nel

percors0 della luce

attraverso zone della cellulaa

in

cui varia l'indice di

rifrazione. Queste tre

immagini si possono

ottenere con lo stesso

(B) microscopio semplicemente

cambiando i componenti

ottici.

(C)

50

um

CAMPIONI FISSATI|

La maggior parte dei tessuti non ha né

dimensioni né trasparenza sufficiente per essere

Per

esaminata direttamente al mlcroscopio.

di solito bisogna fissarll chimicamente

questo e

tagliarli in fettine sottillssime, dette sezioni, che si

montare da

velrino mlcroscopio

su un

possono e

poi colorare per mettere in evidenza l vari

componenti cellulari. Qul si vede una sezione d

apice radicale (D). (Per gentile concessione di

Catherine Kldner.) D) 50 um

Microscopio a contrasto di fase (Zernike 1953 Nobel)

Immagine del preparato

P

.Microscopio ottico

cellule

di viventi

Osservazione

non colorate onde

delle trasmesse

Uso e

aumentato

dopo

diffratte averne Lamina di

la sfasatura: fase

Sfasatura finale vicino a 1/2 A = Ob

immagine scura Onde diffrattea Onde trasmesse

Sfasatura finale vicino a 1/4 A = dipendono dalle

immagine luminosa strutture attraversate c condensatore

Diaframma Df Cono di luce

di fase S

MICROSCOPIA A FLUORESCENZA

Usa la luce ultravioletta, a una lunghezza d'onda 250-350 nm e le strutture

sono analizzate in base alla fluorescenza che emettono nello spettro visibile.

Fluorescenza

Capacità di assorbire radiazioni ultraviolette e di emettere una frazione

dell'energia assorbita con radiazioni nel visibile.

AUTOFLUORESCENZA

Prodotta da sostanze normalmente presenti nel tessuto.

Es: (debole bluastra),

citoplasma luce i granuli (intensa luce giallognola), i

e

fluorescente).

mitocondri (forte emissione

FLUORESCENZA SECONDARIA

Indotta da colorazione sostanze fluorescenti, dette

una fluorocromi

con (DAPI

(4',6-diamidin-2-fenilindolo), fluoresceina isotiocianato rodamina).

o

Percorso della luce in microscopia a fluorescenza:

A

eccitato basso

è dal

il

Ipofluorescenza: preparato Oculare

è dall'alto

ecitato

il preparato

Epifluorescenza: Filtrc

di sbarramento

Lampada

a vapori Specchio dicroico -

di mercurio Lente

dell'obiettivo

Preparato

MICROSCOPIA A FLUORESCENZA

A C

D

E fluoresent hybridization

FISH: in situ

Microscopia a confocale Rilevatore

Secondo foro

Il microscopio confocale analizza Fasci

confocale di emissione

fuori fuoco

permettendo

volta

per

piano

un Filtro

di sbarramento Fascio

tridimensionalita:

la

analizzare

di di emissione

confocale

le immagini

insieme

mettendo Laser

sezioni

diverse

relative alle Specchio

dicroico

ottiche oconsente di ricostruire Primo

foro

l'immagine tridimensionale della confocale

i Unità

struttura. di scansione Lente

dell'obiettivo

Preparato Piani

focali

Microscopia a confocale Tubulina in verde

Actina in rosso

DNA in blu

w

ww neuroni

confocale:

Microscopia a wvine

MICROSCOPIO ELETTRONICO 1931)

(Ruska Srstema

ad alta

tensione

Limite di risoluzione è di 0,2

nm, molto più grande di quello Catodo

ottico 200

pari a nm Filamento

Anodo -

Non utilizzata

viene la luce per Condensatose

rivelarei preparato, ma un Retino

portaoggetto

fascio di elettroni accelerato Lente

fortemente applicando una obiettivo

differenza di potenziale. Il fascio Lente

intermedia

emetterà una radiazione di Lente

lunghezza d'onda dipendente proiettva

dal voltaggio applicato. Finestra-

di.emes, Tilaro

Vuoto all'interno della colonna Schemo

fuorescente

Gli elettroni trasmessi dal Lastra

fotograica

A 150

campione verranno concentrati Sistema

dalle lenti su uno schermo. di pompa

V= 50.000. midano ta

Sistema

ad alta

tensione

Catodo

Differenza di Filamento

potenziale Anodo

MICROscOPIA ELETTRONICA Condensatore

A TRASMISSIONE Retino

II preparato è sezionato e sono portaoggetto

visualizzate le strutture interne Lente

Ingrandiscono obiettivo

P'immagine Lente

intermedia

Proietta Lente

proiettiva

immagine

sullo schermo

Lenti elettromagnetiche fluorescente Finestra

Schermo

fluorescente

Lastra

totografica

Creano il vuoto Sistema

c pompe b

Alto voltaggio

MICROSCOPIA ELETTRONICA A

SCANSIONE - Cannone elettronico

è

Il sono

NON sezionato

preparato e Fascio

visualizzate le strutture esterne, di elettroni primari

la del

tridimensionale

quindi Lente elettromagnetica

struttura condensatore

campione Sistema

Deflettono gli elettroni primari di scansione

modo la

daesplorare Deflettori

in tusso

di

punto

campione

del

superticie

per punto Lente

lettromagnetica

obiettivo

Preparato

Elettroni

secondari Rilevatore Sistema di generazione

di immagini