Esame di Biochimica (parte 3)

Meccanismi

Si considera l'equazione di H. M & M integrata:

v₀ = Vmax [S] / Kr_m + [S]

quando uno dei due substrati è mantenuto costante.

• Bi-Bi Random

- esibito da chinasi ed alcune deidrogenasi

- non è previsto un ordine di priorità

E + A ⇌ EA

  + ↓ +

  B   B

↓ ⇌ ↓   

EB + A ⇌ EAB ⇌_Kat E + P + Q

Tappa Lenta

• Gli equilibri vengono considerati rapidi - li considero all'equilibrio.

v₂ = Kat [EAB]

Si pone al sesto [Ad] = [A] = [Bd] = [B]

e il bilancio di massa per l'enzima sierà:

[Et] = [E] + [EA] + [EB] + [EAB]

dato che abbiamo imposto gli eq, si possono usare le Keq

K_S^A = |E| |A| / |EA|

K_S^B = |E| |B| / |EB|

K_S^AB = |E| |A| |B| / |EAB|

K^AB = |EA| |B| / |EAB|

v_o = |A| |B| / k_cat [ET] K_S^A K^AB + |A| K_S^B |B|/|A| |B| /

Poi si procede al grafico, tenendo uno dei 2 costanti e facendo variare l'altro. → Δ = cost.

v_o / v_max = |B| / K_H^Bapp + |B|

V_max = V_max |A| / K_B^A + |A|

K_B^app = K^AB (K_S^A + |A|) / K_B^A + |A| |B|

• B₁: B₁ ordinato
• esistono delle deidrogenasi NAD o NADP dipendenti.
• uno dei 2 S: due enzimate per primo

E + A ↔ EA + B ↔ EAB k_cat E + P + Q

v_o = k_cat [EAB]

[E]_t = |E| + |EA| + |EAB|

INIBIZIONE

• a. competitiva (REVERSIBILE)
• b. non competitiva:
  • puramente non competitiva
  • di tipo misto
• c. incompetitiva o acompetitiva

Inibitori: sono molecole che interferiscono con la catalisi, rallentando o bloccando le reazioni enzimatiche.

a. Inibitore e substrato competono per lo stesso sito attivo, escludendosi a vicenda (CLASSICA)

L'esclusione può avvenire anche se I si lega in un sito diverso che fa cambiare il sito attivo e di conseguenza non fa legare S. Si parla in questo caso di inibizione competitiva non classica.

E + S ⇌_k2 ES ⇌ E + P

+ I√KiEI

v₀ = V_max / [S]Natural log of 1 + [I]/Ki

Note: V_max resta la stessa.Km è aumentata di α che aumenta all'aumentare di [I] e a valori di Km bassi (alta affinità).