Contaminazioni cellulari, Tecnologie per terapia genica e cellulare

Contaminazioni

Tipi di contaminazioni

Esistono due tipi di contaminazioni più frequenti: le cross contaminazioni e le contaminazioni da mico-plasmi.

Cross contaminazioni

La cross contaminazione si può avere quando si lavora contemporaneamente con due linee cellulari e può capitare, a causa di una distrazione dell’operatore, che alcune cellule di una linea cellulare finiscano nell’altra. Ogni linea cellulare ha la propria identità. Nel corso del tempo cambia la morfologia della linea contaminata, stentano a duplicarsi, non producono fattori per i quali sono selettivi. Se la cross contaminazione si protrae nel tempo, la linea cellulare ha perso la sua identità. Si fanno accertamenti per scongiurare cross-contaminazioni (cariotipo, fingerprinting). È una linea ibrida. Drexter identificò false linee cellulari derivanti da cross-contaminazioni.

Contaminazioni da micoplasmi

I micoplasmi rappresentano un grande gruppo di microrganismi e si possono trovare nei reagenti o anche nell’uomo (sono tutti commensali, parassiti o patogeni). Le infezioni da micoplasma sono piuttosto difficili da diagnosticare, la loro presenza può passare del tutto inosservata provocando profondi cambiamenti nel metabolismo della linea cellulare in coltura (alterazione di livelli di sintesi proteica, alterazioni del fenotipo e del pattern immunofenotipico, ossia caratteristiche esterne della cellula). Anche l’FBS e tripsina porcina possono portare contaminazioni da micoplasmi. Le contaminazioni da micoplasmi possono essere debellate con chinolone ed antibiotici se diagnosticate in tempo.

Banca cellule

Per banca cellule si intende un archivio di cellule dove le cellule sono catalogate e conservate. Le cellule vengono conservate in azoto liquido. Le cellule possono essere acquistate o direttamente da un ricercatore, o indirettamente da altri ricercatori o dalle banche cellule. Alcune delle più importanti banche cellulari sono: ATTC (americana), DSMZ (tedesca). Per scongiurare eventuali contaminazioni, la linea cellulare è sottoposta al controllo di identità, ad esempio tramite il controllo del cariotipo, tramite profilo enzimatico, citogenetica o DNA fingerprinting.

Espansione e mantenimento delle cellule

L’espansione è un processo che porta all’aumento del numero di cellule disponibili con la perfetta conservazione delle caratteristiche biofunzionali delle cellule. Dopo una fase di espansione, è corretto considerare le cellule come archiviabili in una parte della cell bank (sono archiviate e conservate).

Il mantenimento è un processo che porta all’aumento del numero di cellule disponibili allo scopo di fornire le cellule al gruppo di ricerca che le ha richieste. Il processo di mantenimento è unicamente finalizzato al sacrificio.