Dosaggio dei lipidi, tecniche elettroforetiche e immunoblotting nella diagnostica delle dislipidemie

Cameretta elettroforetica con soluzione salina per permettere la conduzione elettrica nella vaschetta.

Per gli ac. nucleici usiamo l'agarosio perché già sono richi negativamente, ma l'unica osa che ci

intereessa è usare un condizione denaturante perché formano strutture secondarie (soprattutto

l'RNA) con separazione orizzontale.

Nel caso della poliacrilammide, viene usata per le lipoproteine ma in questo caso la separazione è

verticale.

In alcuni casi non uso le SdS e quindi uso le proteine in condizione nativa cioè non vado a denaturare

le proteine in qestione perché magari voglio osservare intrazioni con altre proteine o ac. nucleici ecc.

Nel caso della dignostica delle lipoprotine ovviamente uso SdS per diagnosi appunto.

COME SI OTTIENE IL GEL DI POLIACRILAMMIDE?

(N,N-metilen-bisacrilammide è il monomero di partenza)

Vuole sapere solo qual è il catalizzatore che inizia la polimerizzazione, il resto del processo non

importa.

Imparare lo shuttle della carnitina

Struttura della carnitina

Ossidazione degli ac. Grassi pari

La PCR e poi successivamente tramite il sequenziamento serve per identificare mutazione di basi

(codone) della proteina del recettore ad esempio delle LDL.

La prima cosa da fare è preparare il campione ovviamente. Un campione proteico, nel caso di

un prelievo abbiamo un siero oppure un estratto cellulare, delle proteine che derivano dalle cellule che vengon

o opportunamente lisatete oppure il preparato proteico può essere un preparato totale oppure si può fare una

separazione delle proteine nucleari da quelle citoplasmatiche se l’obbiettivo è quello di andare a

separare solamente proteine nucleari. Nel nostro caso abbiamo un campione proteico di plasma.

Nel nostro caso, le proteine migreranno tutte verso il polo positivo (anodo) perché usiamo

l’SdS PAGES che annulla la carica delle proteine rendendole tutte negative.

allora vedete abbiamo un tampone sopra e uno sotto e questo supporto per

elettroforesi ha la possibilità di applicare con dei cavetti opportuni un campo elettrico. Questo qui in celeste

praticamente chiaro non è altro che il gel e queste cose concave qua sono i pozzetti che sono praticamente

ottenuti con dei pettini vengono cioè dai supporti che danno poi una volta rimossi la forma

per raccogliere il campione quindi all'interno di questi pozzetti viene aggiunto con una pipetta con una siringa il

campione. Noi possiamo visualizzare la corsa elettroforetica perché in genere viene anche aggiunto un

colorante, quel colorante però non ti dà nessuna informazione riguardo la stratificazione delle proteine nel gel

ma ti dà idea solamente che sta funzionand