Microbiologia

ENUMERAZIONE DI MICRORGANISMI:

Utile per: monitoraggio di una fermentazione. (Es nello yogurt) , controllo qualitá (presenza di microrganismi in

concentrazioni superiori rispetto a quelle tollerabili), quantificazione di contaminanti e/o patogeni, valutazione di un

trattamento.

Preparazione del campione: campionamento

Dove mi interessa determinare concentrazione microbica

Solidi: liquido si puo analizzare cosi com’è, il solido viene prima trattato: omogeneizzato e reso disponibile come

liquido

Pesata di un prodotto (10 g – 25 g) in sacchetto per omogeneizzazione sterile

▪ + Aggiunta di diluente 1:10. Si usa principalmnete soluzione fisiologica perché é isotonica rispetto alla cellula

▪

1:10 perche risuciamo a diluire bene un campione solido sennó rimarrebbe meno solido o meno concentrato e perche

possiamo usare scala decimale per fare i calcoli

+ omogenizzazione in stomacher che schiaccia alimento

▪

Numero di volte in cui devo fare diluizione dipende da livello di contaminazione e dalla tecnica che usiamo per fare la

conta

Tipi di conta: diretta (microscopio o con

sistemi in cui possiamo aggiungere una sospensione di un batterio diluita in modo che gli organismi siano osservati

in maniera separata tra di loro

Possiamo contare perché conosciamo il volume

N= 12.5

D=10

n=5

V=?

Volume di un quadrato: 0.05 x 0.05 x 0.02 mm =50 mm 5 x 10^-5 mm ^3= 10^ -3 mL

1dm^3 =1 L

Vantaggi

rapidità (conta immediata)

▪ costo relativamente contenuto e impiego di attrezzatura minimo

▪ usando colorazioni differenziali si possono effettuare conte differenziali

▪

Svantaggi

difficoltà nell'ottenere campioni rappresentativi imprecisioni nella misurazione del campione

▪ possibilità di errori nella preparazione dei vetrini, nella conta e nel calcolo

▪ difficoltà o impossibilità nel distinguere cellule vive da cellule morte (usando microscopi a fluorescenza è

▪

possibile usare

coloranti fluorescenti che colorano in modo differenziale le cellule vive e le cellule morte)

▪ difficoltà di conta di cellule mobili o molto piccole

▪ Impossibile contare microrganismi filamentosi

▪ possibilità di errori dovuti all'affaticamento dell'analista

▪

Tecniche microbiologiche utilizzate per contare o isolare microrganismi (batteri, lieviti, muffe) in

laboratorio.

1.Semina per inclusione (o incorporamento)

Scopo: contare o isolare batteri che crescono bene

all’interno del terreno di coltura, non solo in superficie.

Procedimento: Si prepara una piastra di Petri sterile, Si

versa una parte della sospensione microbica nel terreno

di coltura fuso e raffreddato (circa 45 °C, per non

uccidere i batteri), si mescola delicatamente per

distribuire i microrganismi., Si lascia solidificare e poi si incuba.

Risultato: Le colonie crescono sia all’interno che in superficie dell’agar., Si usa per conte microbiologiche o per

microrganismi anaerobi facoltativi.

Esempio d’uso: conteggio totale di batteri lattici nel latte o yogurt.

2. Semina per spatolamento (spread plate)

Scopo: isolare e contare microrganismi sulla superficie del terreno

solido.

Procedimento: Si versa il terreno sterile in piastra e lo si lascia

solidificare, Si deposita una piccola quantità (0,1 mL) di sospensione