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TEST DI TOSSICITÀ

INCUBAZIONE DELLE CISTI E CONDIZIONI DI

SCHIUSA

Idratazione con acqua distillata di 1g di cisti

• Disinfezione con NaClO

• Risciacquo con Na S O

3-

• 2 2

Trasferimento tramite filtro a millepore nello schiuditoio

• con acqua di mare sintetica

Incubazione a 25°C con areatore per 24h (massima

• schiusa 48h)

TEST DI TOSSICITÀ

SEPARAZIONE E RACCOLTA DEI NAUPLII

Raggruppamento tramite

• fototassia sul fondo dello

schiuditoio

Raccolta Nauplii da

• rubinetto dello schiuditoio

su capsula Petri

TEST DI TOSSICITÀ

CALCOLO DELL’EFFICIENZA DI SCHIUSA

Conta al microscopio delle cisti su diluizione di 1:1000

• Conta dei Nauplii (uguale diluizione) con aggiunta di

• Lugol per rallentarne il nuoto

TEST DI TOSSICITÀ

TRATTAMENTO CON TBT

Preparazione soluzioni a

• diluizioni crescenti di TBT

(50, 25,12.5 mg/L)

Riempimento della piastra

• a 96 micropozzetti (3ml)

con soluzioni di TBT

Inserimento Nauplii (± 5

• per pozzetto)

Incubazione piastre al

• buio a 25°C

Controllo a 24, 48 e 72 ore

• TEST DI TOSSICITÀ

ELABORAZIONE DATI E CALCOLO DELLA LC

50

Dai dati ottenuti per ciascuna concentrazione si

• ottiene la percentuale di sopravvivenza

Costruzione della retta su grafico con concentrazione e

• percentuale di sopravvivenza

Lettura sulla retta tracciata del valore di

• concentrazione dell’effetto tossico atteso

IN VITRO

Sperimentazione in provetta

• Analizza un singolo fenomeno isolato dal

• resto dell’organismo

Viene preferita per motivazioni di

• carattere etico

Riproducibile

• Oggettiva

• Usa modelli matematici

• COLTURE CELLULARI

COLTURE CELLULARI

COLTURE PRIMARIE O IMMORTALIZZATE

Colture primarie

• Espianto diretto da un organismo (biopsia)

o Dissociazione cellulare con tripsina (tampone PO ,

42-

o antibiotici, antimicotici)

Terreni selettivi

o Altissima qualità ma limitata riproducibilità

o Vantaggi

•Mantenimento Svantaggi

dell’identità del •Impossibilità di

tessuto d’origine effettuare più cicli di

coltura

COLTURE CELLULARI

COLTURE PRIMARIE O IMMORTALIZZATE

Colture immortalizzate

• Espianto diretto da un

o organismo (biopsia)

Agenti virali, farmaci

o modificano il normale ciclo

cellulare

Ripetizione dell’esperimento

o COLTURE CELLULARI

•Cellule

Colture •Tessuti

•Organi

•Monostrato

Modalità

di •Pluristrato

crescita •Sospensione

•Solidificati

Mezzi di

crescita •Liquidi

COLTURE CELLULARI

CRESCITA SU MEZZI SOLIDIFICATI

Agar

• Diluizione per striscio

o Diluizione per spargimento

o Diluizione per versamento

o

Recipienti:

• Piastre di Petri

o Bottiglie o provette di vetro

o Bottiglie con lati piatti

o COLTURE CELLULARI

CRESCITA IN MEZZI LIQUIDI

Colture discontinue

• 2,303


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DETTAGLI
Corso di laurea: Corso di laurea in scienze biologiche (CALTANISSETTA, PALERMO, TRAPANI)
SSD:
Università: Palermo - Unipa
A.A.: 2014-2015

I contenuti di questa pagina costituiscono rielaborazioni personali del Publisher nicolamilano91 di informazioni apprese con la frequenza delle lezioni di Biochimica ambientale ed Elementi di Tossicità e studio autonomo di eventuali libri di riferimento in preparazione dell'esame finale o della tesi. Non devono intendersi come materiale ufficiale dell'università Palermo - Unipa o del prof Messina Maria Concetta.

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