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Tossicologia e mutagenesi ambientale - Appunti Lezione 12

Appunti per l'esame di Tossicologia e mutagenesi ambientale del professor Scarpato - Lezione 12.
test della cometa;
protocollo sperimentale;
analisi in interfase;
Test del MN in cellule binucleate;
formazione MN;
FISH e campi d'applicazione;
Chromosome painting.

Esame di Tossicologia e mutagenesi docente Prof. R. Scarpato

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ESTRATTO DOCUMENTO

Test della cometa

Il DNA sottoposto a campo elettroforetico alcalino

 (pH=12) o neutro (ph=7) migra verso l’anodo

− rottura legami a H fra le basi

Il DNA integro migra in maniera compatta

 mantenendosi nei contorni del nucleo

Il DNA rotto (frammentato) produce una coda simile

 a quella di una cometa

− SSB (pH alcalino) - DSB (pH neutro)

− Si quantifica il DNA frammentato (migrato) mediante:

lunghezza della coda

 percentuale di DNA presente nella coda o rimasto

 nel nucleo

Protocollo sperimentale

1. Intrappolamento cellule gel di agarorio

2. Lisi cellulare

3. Denaturazione DNA

4. Corsa elettroforetica

5. Colorazione DNA con bromuro di etidio

6. Osservazione microscopio fluorescenza

Analisi in interfase

Analizzare una popolazione cellulare in divisione

indipendentemente dal suo cariotipo

Test del micronucleo (MN) in cellule binucleate

 (ritardo migratorio in anafase)

− perdita cromosomica evento aneuploidogeno

− rottura cromosomica evento clastogeno

Analisi in fluorescenza Tutti i cromosomi

Test di aneuploidia in cellule binucleate

 − non disgiunzione

− perdita cromosomica

Analisi in fluorescenza Alcuni cromosomi

Test del MN in cellule binucleate

Piccolo nucleo accessorio

 − dotato di membrana propria

− si divide autonomamente

− origina da rottura cromosomiche o da interi cromosomi

in ritardo)

itardo migratorio durante l’anafase

 R

− frammento cromosomico acentrico

− intero cromosoma

C

 itocalasina B

− fungo Helminthosporum dematoideum

− blocca la citodieresi

− riconoscere cellule in divisione (aspetto binucleato)

Formazione MN

Perdita di un cromosoma intero

(aneuploidia) MN

MN

Perdita di un frammento cromosomico

(evento clastogeno)

Formazione MN

Perdita intero Perdita frammento

cromosoma cromosomico


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15

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+1 anno fa


DETTAGLI
Corso di laurea: Corso di laurea in scienze e tecnologie per l'ambiente (Facoltà di Agraria, di Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali)
SSD:
Università: Pisa - Unipi
A.A.: 2008-2009

I contenuti di questa pagina costituiscono rielaborazioni personali del Publisher Dalaran191 di informazioni apprese con la frequenza delle lezioni di Tossicologia e mutagenesi e studio autonomo di eventuali libri di riferimento in preparazione dell'esame finale o della tesi. Non devono intendersi come materiale ufficiale dell'università Pisa - Unipi o del prof Scarpato Roberto.

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