Sterilizzazione dei terreni e incubazione delle colture

Sterilizzazione dei terreni e incubazione delle colture

Sia i terreni colturali prima di essere seminati con specie batteriche, sia i recipienti che li ospiteranno, devono essere resi sterili e cioè assolutamente privi di ogni forma di vita. Il metodo più usato e che fornisce le migliori garanzie è l’autoclavatura del terreno e dei recipienti. A questo fine viene utilizzata l’autoclave, un apparecchio costituito da un grande recipiente metallico in cui viene fatto formare vapore sotto pressione in grado di determinare temperature sterilizzanti capaci di coagulare il protoplasma batterico.

Quando il vapore saturo interno raggiunge la pressione di una atmosfera, la temperatura si eleva a 121 °C, e questi valori sono sufficienti a sterilizzare in tempi brevi (circa 15-20 minuti) i terreni posti all’interno in provette e matracci chiusi con tappi (cotone o altro materiale) che consentono la permeazione del vapore ma evitano nel contempo l’inquinamento microbico delle colture.

Un’altra tecnica molto usata per sterilizzare i terreni colturali è basata sull’uso di filtri. Introdotti da Pasteur, essi sono costituiti da membrane filtranti o porcellane porose, a struttura reticolare, in grado di far passare il terreno ma, nel contempo, di evitare il passaggio dei microbi.

Incubazione delle colture

Una volta che il terreno è stato sterilizzato e seminato, affinché la coltivazione abbia successo occorre dare al terreno anche l’ambiente adatto alle esigenze del batterio: esso dovrà essere posto in incubazione a temperature stabilite e costanti in stufe termostatate.

Ciascuna specie batterica ha un proprio optimum di temperatura che ne favorisce la crescita e la moltiplicazione; in genere i batteri patogeni sono mesofili, hanno cioè un optimum di temperatura di circa 36 °C, mentre i batteri psicrofili di 20 °C e quelli termofili di 56 °C.

Il terreno verrà quindi messo in termostato alla temperatura ideale per un tempo ottimale, che, per la grande maggioranza dei batteri, è di 48 ore (incubazione delle colture).