Microbiologia generale - batteri, terreni di coltura e sterilizzazione

Terreni di coltura

Miscela di sostanze organiche ed inorganiche necessarie per la crescita di un determinato microrganismo.

Tipi di terreni

Minimi (definiti)

Composizione chimica definita: Ciascun composto chimico è aggiunto a concentrazioni note.

• Fonte di carbonio organica (glucosio o sostanze organiche più complesse)
• Fonte di azoto inorganica (ammoniaca, nitrati)
• Sali minerali (solfati, fosfati, tracce di altri ioni, ecc.)
• Acqua

Completi

Composizione chimica non definita:

• Fonte di carbonio organica
• Fonte di azoto organica
• Sali minerali
• Acqua

Tutti i terreni devono avere un pH ottimale per la crescita del batterio da coltivare.

Stato fisico dei terreni

In base allo stato fisico i terreni si distinguono in:

• Agar polisaccaride inerte estratto da alghe marine. Solidifica a T < 50°C

Funzioni degli agar

• Studiare in vitro la crescita batterica
• Isolamento di colture pure
• Osservazione della morfologia coloniale
• Conta delle unità formanti colonia (UFC)

Le colture pure

Per coltura pura si intende una coltura costituita da una popolazione di microrganismi derivanti tutti da una singola cellula madre.

Caratteristiche colturali

• Forma
• Spessore
• Margine
• Tipi di colonia
• Margini: netti, frastagliati
• Aspetto: liscio, mucoso
• Pigmento
• Rilevata
• Piatta

Classificazione qualitativa dei terreni

In base al compito che un terreno deve svolgere si distinguono:

Terreni elettivi

Terreni ricchi di nutrienti, che consentono la crescita di quasi tutte le specie batteriche. Es. Agar sangue, LB, TSA

Terreni selettivi

Terreni che favoriscono la crescita di alcune specie batteriche, grazie alla presenza di sostanze che inibiscono lo sviluppo di altre specie. Usati per isolare microrganismi da campioni contenenti abbondante flora commensale. Es. MacConkey Agar, Mannitol-Salt Agar, Sabouraud Agar

Terreni differenziali

Terreni che permettono una identificazione presuntiva delle specie isolate, addizionando nutrienti utilizzabili solo dal batterio ricercato e indicatori di pH che segnalano la presenza di prodotti di degradazione del nutriente utilizzato. Es. Hektoen Enteric Agar, MacConkey Agar

MacConkey agar

In questo terreno sono presenti sia il cristalvioletto che i sali biliari, in grado di inibire la crescita dei batteri Gram-positivi (Terreno selettivo).

• Colonie incolori: Il batterio non fermenta il lattosio, quindi le colonie mantengono il colore del terreno. Es. Salmonella typhi
• Colonie acidificanti (rosse): La fermentazione del lattosio produce acidi che fanno virare il colore dell'indicatore verso forma acida. Es. E. coli (Terreno differenziale)

Hektoen enteric agar

(Terreno differenziale)

• Colonie incolori: Salmonella: colonie lac-
• Colonie acidificanti: Salmonella: colonie lac+