Relazione di tirocinio su laboratorio analisi cliniche

Corso di laurea in scienze e tecnologie biologiche

Costante Valentina (matricola 140831)
a.a 2012/2013

Relazione di tirocinio

Struttura ospitante: Centro diagnostico S. Francesco S.R.L.
Via degli Stadi Strada VI, 287100 Cosenza (CS) tel.: 0984412191

Tutor: Dott. Cimini Roberto

Indice

• Introduzione
• Fotometria
• Esame delle urine
• Determinazione dei gruppi sanguigni
• Saggi immunologici
• Saggi immunoenzimatici:
• Determinazione del CEA
• Test androstenedione ELISA
• Determinazione degli ormoni della tiroide

Introduzione

Gli esami di laboratorio vengono richiesti per confermare un sospetto clinico, porre o escludere una diagnosi, monitorare una terapia, stabilire una prognosi e ricercare una malattia. Il lavoro di laboratorio viene misurato in termini di assicurazione di sicurezza della qualità per ottenere i massimi contributi per il beneficio del paziente e l’assistenza del medico.

La produzione di un risultato attendibile richiede una stretta aderenza ad un insieme di principi di laboratori clinici di base, che assicurano una adeguata raccolta del campione prima delle analisi, una ottimale gestione del materiale, l’uso di reattivi ed il controllo dell’ambiente. Il sangue è il fluido corporeo più frequentemente utilizzato a scopo di analisi, inoltre tre sono le principali procedure per ottenere il campione di sangue: puntura arteriosa, puntura venosa e puntura cutanea.

L’esame delle urine è considerato una biopsia tissutale liquida e fornisce una vasta gamma di informazioni, gli esami di laboratorio sul liquido urinario si distinguono in esami chimici, batteriologici e microscopici. Il Centro diagnostico San Francesco s.r.l è un laboratorio di analisi a scopo diagnostico predisposto nei tests di genetica: allo sviluppo dei tumori; allo sviluppo di patologie cardiovascolari; alla diagnosi molecolare precoce dei tumori mediante analisi del DNA; infettivologia molecolare, osteoporosi, sterilità e indagini citogenetiche.

Fotometria

La maggior parte delle analisi effettuate nei laboratori clinici si basa su misure di quantità di luce assorbita delle particolari sostanze in esame, dove molte di esse vengono effettuate nella regione del visibile. Le tecniche dell’infrarosso vengono impiegate per determinare la composizione dei calcoli renali e biliari e per analizzare farmaci e sostanze purificate di interesse tossicologico. Fino al 1930 la maggior parte degli strumenti di laboratorio erano fatti a mano, solo nel 1950 si ha l’introduzione degli spettrofotometri, i fluorometri e le bilance automatiche.

La radiazione elettromagnetica è un fenomeno ondulatorio in propagazione, i cui parametri tipici sono la frequenza (o alternativamente la lunghezza d'onda), il vettore d'onda, la velocità di propagazione e l'energia associata all'onda. La gamma di frequenze possibili è estesa tra 0 ed infinito, e viene detta spettro elettromagnetico. Un'onda elettromagnetica si genera a partire dalla variazione nel tempo di una corrente elettrica, o equivalentemente dal moto non uniforme di una carica elettrica nello spazio-tempo, in cui si assiste alla trasformazione/conversione di energia cinetica in energia elettromagnetica. L'onda elettromagnetica va trattata dunque come l'energia del campo elettromagnetico che si propaga oscillando nello spazio-tempo, irradiata a partire dalla sorgente del campo stesso.

La spettrofotometria designa lo studio degli spettri elettromagnetici. Essa si occupa di luce visibile, dal vicino ultravioletto al vicino infrarosso e richiede l'uso di spettrofotometri. Uno di tali strumenti è un fotometro, cioè un dispositivo per la misura dell'intensità luminosa, che può determinare l'intensità come funzione della lunghezza d'onda della radiazione luminosa. Lo spettrofotometro misura quantitativamente la frazione di luce che attraversa una determinata soluzione. In uno spettrofotometro, una luce proveniente da una lampada nella regione vicino-IR/VIS/UV (tipicamente una lampada a scarica in gas deuterio per l'UV/VIS e particolari lampade ad incandescenza per l'IR) viene guidata attraverso un monocromatore che separa dallo spettro complessivo la radiazione di una particolare lunghezza d'onda.

Questa luce passa attraverso il campione che deve essere sottoposto alla misurazione. Attraversato il campione, l'intensità rimanente della radiazione viene misurata mediante un rivelatore costituito da un fotodiodo o da un altro sensore luminoso; questo consente di calcolare la trasmittanza della lunghezza d'onda in esame. In ottica la Legge di Beer-Lambert, è una relazione empirica che correla la quantità di luce assorbita da un mezzo alla natura chimica, alla concentrazione ed allo spessore del mezzo attraversato. Quando un fascio di luce (monocromatica) di intensità I attraversa uno strato di spessore l₀ di un mezzo, una parte di esso viene assorbita dal mezzo stesso e una parte ne viene trasmessa con intensità residua I₁. Il rapporto tra le intensità della luce trasmessa e incidente sul mezzo attraversato è espresso dalla seguente relazione: la trasmittanza (T) è definita quindi come il rapporto I₁/I₀, l’assorbanza (A) è definita l'opposto del logaritmo naturale della trasmittanza.

La fotometria viene utilizzata ad esempio nella determinazione del calcio, fosforo, magnesio e urea. Il metodo più vecchio e più utilizzato nella determinazione del calcio totale è quello di Clark e Collip oggi sostituito da altri procedimenti fotometrici, fluorometrici e dallo spettrofotometro ad assorbimento atomico. Utilizzando lo spettrofotometro ad assorbimento atomico il calcio del siero o delle urine viene diluito con una soluzione di cloruro di lantino al fine di eliminare le interferenze dovute alla presenza di proteine e ai fosfati, la fiamma quindi dissocia gli ioni calcio con un assorbimento che si attua ad una lunghezza d’onda di 400 nm, così una piccola quantità di calcio viene portata a livelli energetici più elevati emettendo radiazioni che sono proporzionali alle concentrazioni totali di calcio.

Esame dell'urina

L’urina è il prodotto finale dell’escrezione renale e rappresenta il principale mezzo attraverso cui l’organismo si libera dalle sostanze estranee o tossiche e dalle scorie dei processi metabolici: componenti minerali, proteine e derivati proteici, glucosio, acetone e acido ossalico, acido citrico, fenoli, acidi grassi liberi, ecc. Si presenta normalmente come un liquido limpido giallognolo, di odore penetrante, talora lievemente aromatico, principalmente è composta per il 95% di acqua e per il resto di sostanze organiche e sali inorganici.

Per quanto riguarda le sostanze organiche, il composto che si ritrova in maggior quantità è l’urea, il prodotto ultimo del metabolismo delle proteine, che si produce per deamminazione degli amminoacidi. Altro componente è l’acido urico, che si ottiene metabolizzando gli acidi nucleici, e la cui quantità dipende da quanto l’alimentazione è ricca di composti purinici. Inoltre, nell’urina si trovano alcuni pigmenti tra cui tracce di bilirubina idrosolubile, urocromo, che conferisce il caratteristico colore giallo, e numerose sostanze di origine ormonale. I sali inorganici presenti nell’urina sono rappresentati essenzialmente da cloruri, fosfati e solfati.

L’urina fluisce nella pelvi renale, quindi nell'uretere e si raccoglie nella vescica, organo cavo preposto al suo accumulo. L'emissione di urina avviene poi attraverso l'uretra, e viene definita minzione. Il campione di urina fornisce informazioni non solo sulla presenza di malattie renali ma indica anche il tipo di lesioni presente. L’urina in laboratorio viene dapprima centrifugata dove avviene la separazione dell’urea del sodio e del cloro, così da differenziare la probabile urina dall'asseduato di plasma o di siero. Le urine vengono esaminate entro 2 ore dalla minzione altrimenti si avrebbe la decomposizione di eritrociti e leucociti.

Gli esami di routine dell’urina si dividono in:

• Valutazione del campione
• Test fisici
• Esame chimico
• Esame del sedimento

L’esame fisico consiste nel rilevare colore ed aspetto del liquido fisiologico in esame. Questo esame dà un giudizio preliminare sulle urine: l’aspetto, il colore, il sedimento e il peso specifico sono importanti indizi diagnostici. La prima operazione consiste nel rimescolare il campione per renderlo omogeneo. Si osserva l’urina per apprezzare il suo aspetto che può essere limpido, opalescente o torbido quindi si rileva il colore che può variare in diverse sfumature di giallo che vanno dal giallo pallido al giallo bruno.

La densità delle urine è espressa dal loro peso specifico, che dipende dalla quantità relativa di acqua contenuta e dal tipo di soluti disciolti. I valori normali oscillano tra 1017 e 1025.