Relazione Laboratorio di Microbiologia

Relazione laboratorio di microbiologia 28-29 settembre 2020

Protocollo operativo per la colorazione di Gram

La colorazione di Gram permette di distinguere e classificare i batteri presenti in un campione in due principali categorie: Gram positivi e Gram negativi.

Fissare una colonia di batteri sul vetrino, aggiungere poche gocce di cristalvioletto alla colonia e lasciare agire per 1 minuto, quindi gettare il liquido in eccesso. Sciacquare con acqua, lasciare agire per 1 minuto, decolorare con alcool 95% e aggiungere ioduro. Sciacquare con acqua per 5–10 secondi e risciacquare. Aggiungere safranina, lasciare agire per 1 minuto e risciacquare. Lasciare seccare all'aria e osservare al microscopio a 1000x con aggiunta di olio.

Domande e risposte

• Perché è necessario risospendere i batteri in acqua prima di distenderli sul vetrino? Per distenderli e poterli vedere meglio dopo colorazione.
• A cosa serve la fissazione? Stabilizzare il campione e fissarlo al vetrino dopo il lavaggio, preservare le strutture cellulari e facilitare la preparazione del colorante.
• Perché è necessario lavare sempre con acqua distillata dopo ogni passaggio? Se allunghiamo eccessivamente i tempi, si possono colorare delle strutture aspecifiche e può confondere i risultati.
• Osservando il preparato al microscopio, ti si propone questa immagine: il batterio è viola. È Gram positivo o Gram negativo? Gram positivo.
• Se dovessi omettere il passaggio di fissazione con la soluzione di Lugol, cosa ti aspetteresti di osservare alla fine della colorazione? Tutti i batteri si colorano di rosa, e senza mordenzante (Lugol), alcune pareti cellulari non manterrebbero il colore e non riuscirei a distinguere i negativi dai positivi.

Curva di crescita batterica

In microbiologia generale si studia la crescita di una popolazione piuttosto che delle singole cellule. Detto ciò, si può osservare come questo andamento sia stato categorizzato in una curva di crescita rappresentata da:

• Cinetica osservata quando i microrganismi sono coltivati in terreno liquido (brodo di coltura) in un sistema chiuso (batch).
• Misura la variazione di «quantità» (massa totale o numero di cellule vitali) di batteri nel tempo.
• Rappresentazione grafica di tipo «semilogaritmico».
• Log10 (CFU/ml) vs tempo.

Le fasi principali della curva di crescita sono date da:

• Fase lag o fase di latenza.
• Fase log o fase logaritmica.
• Fase stazionaria o plateau.
• Fase di declino o morte.

Fase di latenza: nella fase lag non c’è un aumento del numero di cellule. Si tratta infatti di una “fase di adattamento” dove si potrebbe eventualmente apprezzare un lieve aumento.