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Immunologia - TCR e diversità Appunti scolastici Premium

Appunti di Immunologia del professor Abbate su TCR e diversità con analisi dei seguenti argomenti: rigetto specifico, reazione linfocitaria mista, fenotipo immunitario, recettore dei linfociti, antigene modificato, la restrizione per MHC, struttura ed organizzazione del TCR, differenziamento linfocitario.

Esame di Immunologia docente Prof. G. Abbate

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ESTRATTO DOCUMENTO

Infezione di cellule bersaglio con il virus della

coriomeningite linfocitaria (LCM) produceva

linfociti citotossici specifici

i linfociti non reagivano con il virus libero o antigeni virali

nessuna citolisi

citolisi k k

k H-2 H-2

H-2

linfociti TCR TCR

TCR d

k

k H-2

H-2

H-2

APC LCM LCM

LCM Doherty & Zinkernagel 1975

ANTIGENE ESOGENO MODIFICA L'ANTIGENE PROPRIO MHC

IL RECETTORE PER L'ANTIGENE ESOGENO E' RESTRETTO PER L'MHC

Y Y

Y

Y Y Y

Y

Y Y Y

Y Y

Y Y

Y Y Y

Y

Y

Y Y

YY

Y YY

Y YY

Y

Y Y Y

Y Y

YY Y

Y

YY

YY Y

Y Kappler et. alt, 1981

La scoperta della molecola recettore dei linfociti T

la sorgente del recettore

isolamento di linfociti T capaci di reagire verso un bersaglio APC

popolazioni policlonali

Lectine Fitoeamtoaggutinina (PHA)

Concavalin A (Con A)

molecole capaci di legare a ponte parti del

SuperAntigeni MHC ed la catena beta del TCR

anticorpi diretti verso determinanti

Anti-CD3, Anti-TCR invarianti del complesso CD3 e/o delTCR

popolazioni monoclonali

linfociti stimolati mediante attivatori

cloni T che simulano le fasi del riconoscimento

con il peptide presentato

ATTIVATORI POLICLONALI

n°10000

n°1

linfocita T linfociti T

15gg

un pozzetto colonia di cellule identiche

Linee di tumori derivati da linfociti T

leucemie , linfomi, (es. Jurkat)

Ibridomi T

fusione di cellule di tumore derivato da cellule T immaturi e linfociti T

TCR

timoma T

ibridoma resistente alla

cellula immortale Aminopterina

milioni di cellule

ANTIGENE MODIFICATO

IBRIDOMA LINFOCITA T

f

K IA

IA f

IA

K

IA

specificità EGG KLH

TCR TCR

verso f

IA K

IA

bi-IBRIDOMA K

IA f

IA

EGG KLH

TCR TCR

CELLULE APC

ATTIVA non attiva

K

f f K

IA

IA IA IA

KLH EGG EGG KLH

LA RESTRIZIONE PER MHC

LA SPECIFICITA' DEL TCR PER LA MOLECOLA MHC

VERSO LE PARTI POLIMORFICHE DEI DOMINI CHE

COMPONGONO LA TASCA PER IL PEPTIDE

TCR MHC

Southern blot DNA genomico di linfociti B

i geni del TCR sono espressi solo in linfociti T

possedere i caratteri di clonalità come i geni dell'anticorpo

l'organizzazione genica, simile all'anticorpo, conferisce l' idiotipia

librerie ottenute per sottrazione con mRNA di linfociti B

linfocita T linfocita B

mRNA mRNA mRNA

cDNA cDNA

ibridazione sottrazione su

cDNA/mRNA

cDNA Idrossiapatite

λ

inserimento in cromosoma del fago

cloni di fago

sonda per Souther blot

su genoma digerito con enzimi di

restrizione da Linee di cellule

la

llu

ce

mappe di restrizioni B

del DNA genomico a cloni T

om

2

diverse per ogni linea ep nf 1 2 3 4 5 6 7 8

H Li 1

o cloni cellulare sonda

clone 1 1

sonda

clone 2

identica mappa di

restrizione per linee o

cloni di linfociti B

o altra cellula somatica

cellula diversa da linfocita T

Eco Eco Eco Eco

5' 3'

sonda1

Eco Eco Eco Eco

sonda1

Eco Eco Eco

da linfocita T sonda1

Il clonaggio delle sequenze di DNA codificante delle catene del TCR

ha consentito di ricreare cellule (con carattere idiotipico ovvero

individuale) capaci di esprimere in il recettore specifico verso un

complesso peptide-MHC specifico

il TCR il peptide

l' MHC

contrae con ciascuno di questi mediante legami non covalenti:

tipo idrogeno, idrofobici, Van der Walls, ionici, ecc.

il legame specifico è

la somma dell'energia dei singoli legami deboli contribuisce alla forza

complessiva dell'interazioni

Srtuttura ed organizzazione del TCR

TCR TCR γ

α Chrom 14

40-50KDa 45-60KDa

Chrom 7 δ

β Chrom 7

Chrom 14 50-60KDa 50-60KDa

oppure

CD3

γ 25-28KDa

Chrom 11 δ 20KDa

ε 20KDa

ζ 16KDa

η 22KDa

dominio immunoglobulinico V 110aa.

90aa.

dominio immunoglobulinico C

dominio cerniera H 25aa

dominio trans-membrana

coda intra-citoplasmatica

ponte di Solfuro S-S α β

ITAM

Immunorecepto

r

Tyrosin-based γ

ε δ ε ζ

ζ

Activation

Motif SS SS

mmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmmm

-D

-D -D -D -D

+K +R -D

x Y x x L (X) Y x x L x

6-8 COOH

2(αβ) 2ε γδ 2ζ

stechiometria

ζ ζ

- - +

+

α α

+

+ γ

δ

- -

β β

ε

ε +

+ - -

assemblaggio αβ ω

reticolo endoplasmatico associato ad

αβ + εε + γδ ω

apparato di Golgi dissociano

αβ εε γδ + ζζ ο ζη

membrana citoplasmatica

1

N

4 2

3 C''

A G F C'

B C

E

D C

N

A G F

B C

E

D C C.Garcia et al. Science 1996 274:209

1

N CDR3

CDR2

4 2

3 3

CDR1

100 2

C''

A G F C'

B C

E

D 1

%

C

N variabilità

A G F CDR4

B C

E

D 50

25 75 100 125

posizione aminoacido nella sequenza

C

legame tra TCR e MHC in presenza di antigeni

non processati Superantigeni

C.Garcia et al. Science 1996 274:209

modello del tritopo

A. Bankovich and C. Garcia -IMMUNITY, 2003

R.Weil, alt. and A. Israël -IMMUNITY 18, JAN,2003

segnali extracellulari

ligandi

MHC-peptide molecole accessorie

attivazione del recettore

trasferimento dei segnali

controllo genetico

espressione genica

nuovo stato cellulare

Basi della diversità dei recettori per gli antigeni

Anticorpo, TCR

Geni multipli

Ricombinazione somatica

Conversione genica

Mutazione somatica


PAGINE

55

PESO

5.16 MB

PUBBLICATO

+1 anno fa


DETTAGLI
Esame: Immunologia
Corso di laurea: Corso di laurea magistrale in medicina e chirurgia (ordinamento U.E. - durata 6 anni) (CASERTA, NAPOLI)
SSD:

I contenuti di questa pagina costituiscono rielaborazioni personali del Publisher valeria0186 di informazioni apprese con la frequenza delle lezioni di Immunologia e studio autonomo di eventuali libri di riferimento in preparazione dell'esame finale o della tesi. Non devono intendersi come materiale ufficiale dell'università Seconda Università di Napoli SUN - Unina2 o del prof Abbate Gianfranco.

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