Esercitazioni laboratorio microbiologia 2

Determinazione di Escherichia coli

Si prelevano 10 g circa di prodotto (ad esempio, formaggio fresco) e si inseriscono nel sacchetto Stomacher. Si aggiunge una soluzione in quantità tale da eseguire la prima diluizione decimale.

Citrato di sodio

Si omogeneizza il tutto e si eseguono le successive diluizioni. A questo punto si esegue la semina in piastra per spatolamento di 0,1 mL della diluizione precedente a quella da eseguire su TBX. Si inocula in TBX, che è un terreno specifico per isolare ceppi di E. coli. Si ha infatti una reazione enzimatica (visibile dal viraggio) determinata dal fatto che E. coli possiede un enzima specifico in grado di reagire con l’indicatore. Si procede all'incubazione a 44°C per 18-24 ore. A questa temperatura, i coliformi non sono in grado di crescere, pertanto l’incubazione risulta un’ulteriore selezione. Al termine, si contano le colonie tipiche.

Determinazione dei batteri lattici

Si prelevano 10 g circa di prodotto e si inseriscono nel sacchetto Stomacher. Si aggiunge una soluzione in quantità tale da eseguire la prima diluizione decimale.

Citrato di sodio

Si omogeneizza il tutto, si eseguono le successive diluizioni e si esegue la semina in piastra per ciascuna delle diluizioni eseguite. Si aggiungono 15-20 ml di fuso e raffreddato a 40°C in ogni piastra (terreno selettivo per i batteri lattici). Si pongono le piastre in anaerobiosi (i lattici sono anaerobi facoltativi). Incubazione in termostato a 37°C per 72 ore. Al termine, si contano le colonie nelle piastre.

Determinazione di lieviti e muffe

Si prelevano 10 g circa di prodotto e si inseriscono in sacchetto sterile. Si aggiunge una soluzione in quantità tale da eseguire la prima diluizione decimale.

Sale triptone

Si omogeneizza il tutto e si eseguono le successive diluizioni. A questo punto si esegue la semina in piastra per spatolamento di 0,1 mL della diluizione precedente a quella da eseguire su YGC. Si procede all'incubazione in termostato a 25°C per 3-5 giorni. Al termine, si contano le colonie in piastra.

Determinazione di spore di Bacillus cereus

Si prelevano 10 g circa di prodotto e si inseriscono in un sacchetto sterile. Si aggiunge una soluzione in quantità tale da eseguire la prima diluizione decimale.

Sale triptone

Si omogeneizza il tutto. Si prelevano 10 ml e si trasferiscono in una provetta vuota sterile. Si pastorizza la sospensione a 80°C per 10 minuti. Si eseguono quindi le diluizioni successive. Si esegue la semina per spatolamento di 0,1 ml della diluizione precedente a quella da eseguire su piastre di P.E.M.B.A. Incubazione in termostato a 37°C per 48 ore. Al termine, si contano le colonie.