Colorazione di Gram e di Zielh Neelsen

Colorazione di Gram e

di Zielh-Neelsen

Colorazione di Gram.

È la piu importante colorazione usata in batteriologia. Messa a punto

dal patologo danese nel 1884, consente di differenziare i

Christian Gram

batteri in due categorie, Gram-positivi e Gram-negativi. La colorazione

di Gram si esegue nel seguente modo:

dopo aver fissato al calore il preparato su vetrino, si ricopre lo

striscio con il primo lasciandolo

colorante basico, cristal-violetto,

agire per 1 minuto

si allontana il colorante in eccesso e si mordenza la colorazione con

una in acqua (mordente: liquido

soluzione di iodio e ioduro di potassio

di Lugol), lasciando agire il trattamento per 1 minuto

si tratta poi il preparato con un (alcol o

decolorante etilico acetone)

•

per circa 20 secondi

il preparato viene quindi trattato per 1-2 minuti con il secondo

• (di o dal colore facilmente

colorante contrasto), fucsina safranina,

differenziabile (rosso) rispetto a quello del primo colorante usato

(viola)

si allontana il colorante in eccesso e si asciuga il vetrino.

• Al termine della colorazione di Gram i batteri possono apparire al

microscopio ottico di colore viola, e sono detti Gram-positivi

(Gram+), oppure di colore rosa-rosso, e allora sono detti Gram-

(Gram–). Nei batteri Gram+ colorati in violetto il

negativi

decolorante non riesce ad asportare il complesso cristal-

violetto-iodio, mentre i batteri Gram– colorati di rosso sono

decolorati dall’alcol (o dall’acetone) e assumono il secondo

colorante rosso di contrasto. La diversa reazione dei batteri alla

colorazione di Gram e ascrivibile alla diversa permeabilita degli

involucri cellulari, che risulta maggiore nei Gram– (tale da

permettere l’azione di asportazione esercitata dal decolorante) e

minore nei Gram+. Si e poi visto che alla Gram-positivita e Gram-

negativita dei batteri si accompagnano ampie e significative

differenze strutturali e funzionali, come la maggiore o minore

presenza nella parete batterica del peptidoglicano che nei Gram+

risulta preponderante, cosi che la colorazione di Gram

costituisce un importante carattere differenziale nel mondo

batterico.