Appunti biologia molecolare

Lezione 2 30/09/2015

Esperimento Griffith (1929)

Definito anche esperimento di "trasformazione batterica".

• Benigno senza capsula
• Virulento (con capsula)

• Batteri del ceppo S -> Topo morto
• Batteri del ceppo R -> Topo vivo
• Batteri del ceppo S inattivati -> Topo vivo
• Batteri del ceppo R uniti a batteri del ceppo S inattivati -> Topo morto

Il ceppo R acquisiva la capsula, una volta mescolato con il ceppo S; quindi un tratto del ceppo S presente nel ceppo R (principio trasformante).

Esperimento Avery (1944)

Attraverso degli estratti presi dai batteri sciolti in varie provette, notò che ciò che veniva trasmesso era la molecola di DNA.

Esperimento del frullatore (1952)

Hershey e Chase marcarono 20¹⁴ con isotopo radioattivo 35^S e il ceppo radioattivo e il DNA con 32^P (fosforo radioattivo).

Con un frullatore venivano staccate delle code della parte esterna. 2 virus venivano separati per centrifugazione.

Centrifuga materiale pesante sul fondo materiale leggero resta sopra

I batteri assorbivano le proteine e il resto del materiale radioattivo restava fuori. Contribuivano 80% di tutto con le proteine. Risultati: Utilizzando il fosforo di DNA 32^P-³², otteniamo 30% del DNA, 70% del tutto, il DNA. Il DNA veniva assorbito. Conclusione: il gene è presente nel DNA dei batteri e non delle proteine marcate con essi. Questo rimase fuori.

Isotopi

Sono atomi d'uno stesso elemento chimico con lo stesso numero atomico ma con diverso numero di massa.

• Si dividono in:
  • Stabili
  • Non Stabili (radioattivi)
• La differenza nel numero di massa dipende dal numero diverso di neutroni presenti nel nucleo.
• Sono forme diverse di uno stesso elemento. Hanno lo stesso comportamento chimico e occupano la stessa posizione nella tavola periodica.
• Si differenziano per le proprietà fisiche perché hanno masse diverse.

Isotopi del Fosforo:

• 31 P (stabile)
  • 16 neutroni
  • 15 protoni
• 32 P (radioattivo)
  • 17 neutroni
  • 16 protoni

  Viene usato nella ricerca biochimica come tracciante per DNA ed RNA.

• 33 P (radioattivo)
  • 18 neutroni
  • 16 protoni

  Viene usato nella ricerca biochimica come emittore di raggi beta a bassa energia.

Isotopi dello Zolfo:

• 32 S (stabile)
  • 16 neutroni
  • 16 protoni
• 33 S (stabile)
  • 17 neutroni
  • 16 protoni
• 34 S (stabile)
  • 18 neutroni
  • 16 protoni
• 35 S (radioattivo)
  • 19 neutroni
  • 16 protoni

La relativa posizione delle basi è stata catalogata in vari parametri:

TWIST: angolo tra due coppie di nucleotidi successive. elica

ROLL: inclinazione che si forma in base alla piezza di separazione due coppie di nucleotidi rispetto all'asse dell'elica appaiamento A-T o C-G

TILT: angolo che si forma sempre per separazione rispetto alla posizione dello scheletro zucchero e

FORMA A

1. Destrorsa
2. Le coppie di basi presentano una maggiore angolatura rispetto al piano perpendicolare all'asse della doppia elica (differente con forma B)
3. Ci sono 11 coppie di basi per ogni giro dell'elica
4. L'altezza dell'elica è di 25 Å e il diametro è di 23 Å
5. Si trova nel vivo per duplex di RNA oppure un DNA se un RNA

FORMA Z

1. Sinistrorsa
2. Diametro di 18 Å e un passo di 46 Å
3. È un'elica magra nell'angolatura
4. La causa di generare il DNA Z è il cambiamento di orientamento del legame e fosfodiestere tra lo scheletro di deossiriboso. Nella forma B lo zucchero e la base sono allineati nella conformazione ANTI mentre nella forma Z sono in conformazione SYN

CONFIRMAZIONE ANTI SYN Nella prima, possiamo trovare un legame azzurro si trova in estensione lineare, mentre in questa forma il nucleotico in conformazione con le sostanze verbali c'è della presenza.

A questo esastato avviene perché sul tRNA adeguato può essere aggiunto in un

orientamento anche la codifica del DNA di codoni stop.

Il codon stop potrebbe essere provvisoriamente provocando una parziale funzione successiva, aggiungere dell'estratto al mutante codone stop per determinare.

c.

si attiva nel genoma per stabilire solo alcune parole corrispondenti. I

CAR codifica in relazione al costruzione di nuovi terminazione

successivamente perché il codice di nucleiotidi e codoni stessi.

Nel RAI costituisce una costruzione in cui a triplette di

DNA e mRNA si possa usare un mRNA e di

provocare un parte nel ribosoma.

Mutazioni a Soppressione o Amber

Sono mutazioni che introducono un codone di

stop prematuro provocando la formazione di una proteina tronca.

Codoni stop quindi non senso

perché perdono una parte dell'informazione.

Il codice genetico è universale

Un amminacido può essere

codificato da più codoni.

Codoni sinonimi: diversi codoni

che specificano per lo stesso aa.

In ogni caso fatto viene della codifica degenerante.

CIOE fanno parte del DNA messaggio

sono le patte dei RNA che

sono 2010 codoni i multocodoni

trascrizione complementare dei

codoni.

• Il riconoscimento del codone amammino inplicazione in caso appaiamento di basi complementari.
• Il codone HI passive RNA... ehm tentare di asso a ispecie per
• trascorretto di modo
• codzione nel caso per altri
• poo diverse del codone
• un aminoacido caso codone con il altro simile dell'orientamento
• dell'allineamento codon.

per far uso del codice.

Teoria del bilanciamento vacillamento:

Il riconoscimento del codone relaziona di passo del importante

di modo appaiamento delle basi.

Sono necessari almeno 32 tRNA diversi

fra tradizional per

decodificare tutti

per codoni.

Alcuni tRNA hanno delle lismpie posizionato

alcuni codone della base.

oppure permette ripetute

e non specifico proccesso sempre

delle basi particolari.

degenereiente per improrietà.

wiggle

C C I

GGU GGC GGA

C C I GCI

Origine attivata

Per una molecola di DNA circolare la replicazione può procedere bidirezionalmente partendo dalla bolla di replicazione oppure più grande

Replicazione bidirezionale (struttura theta)

La replicazione bidirezionale a partire da specifiche origini è il meccanismo più comunemente usato in procarioti ed eucarioti anche se in alcuni casi la replicazione può procedere unidirezionalmente

Replicazione unidirezionale (D-loop)

È possibile valutare se su un'unica molecola di DNA esistono più origini di replicazione

Molteplici origini di replicazione

ORIGINE DI REPLICAZIONE:

corrisponde a una particolare sequenza di DNA da cui parte il processo replicativo che procede nella maggior parte dei casi bidirezionalmente originando una bolla di replicazione

Possiede in cui avviene il distacco della eliche del DNA