Appunti biologia molecolare

Lezione 2 30/09/2015 RECO12

Esperimento Griffith (1928)

Definito anche "esperimento di trasformazione batterica".

Attraverso lo studio dello Streptococcus pneumoniae notò che nelle cellule vive venisse trasmesso qualcosa di fisico (DNA).

• S = maligno (con capsula)
• R = benigno (senza capsula)

Batteri del ceppo S → TOPO MORTO

Batteri del ceppo R → TOPO VIVO

Batteri del ceppo S inattivati → TOPO VIVO

Batteri del ceppo R uniti a batteri del ceppo S inattivati → TOPO MORTO

(Il ceppo R acquisiva la capsula una volta mescolato con il ceppo S, quindi un gene del ceppo S penetrava nel ceppo R conferendolo S - principio trasformante).

Esperimento Avery (1944)

Attraverso degli estratti presi dai batteri, disciolti in varie piccole provette, notò che ciò che veniva trasmesso era la molecola di DNA.

Esperimento del frullatore (1952)

Hershey e Chase marcarono con isotopi radioattivi: 35S (zolfo radioattivo) le proteine, e il DNA con 32P (fosforo radioattivo).

... il virus venivano separati per centrifugazione.

LATURA PESANTE

CENTRIFUGA: materiale pesante sul fondo, materiale leggero sopra

... batteri invece … il DNA

… materiale presente nei batteri...

Lezione 2 30/09/2015 RECO12

Esperimento Griffith (1929)

Definito anche esperimento di trasformazione batterica.

Attraverso lo studio dello Streptococcus pneumoniae osservò che nella cellule vive trasmesso qualcosa di fisico.

• S → benigno (senza capsula)
• R → maligno (con capsula)

• Batteri del ceppo S → TOPO MORTO
• Batteri del ceppo R → TOPO VIVO
• Batteri del ceppo S inattivati → TOPO VIVO
• Batteri del ceppo R uniti a batteri del ceppo S inattivati → TOPO MORTO

Il ceppo R acquisiva la capsula una volta associato con il topo e quindi un qualcosa del ceppo S penetra nel ceppo R, convertendolo in → R (principio trasformante).

Esperimento Avery (1944)

Attraverso degli estratti presi dai batteri, distribuiti in varie provette, notò che ciò che veniva trasmesso era la molecola di DNA.

Esperimento del Frullatore (1952)

Hershey e Chase marcarono con isotopi radioattivi:

• 35S (zolfo radioattivo)
• 32P (fosforo radioattivo)

Con un frullatore venivano staccate dalle cellule batteriche e dalla miscela virale, che venivano separate per centrifugazione.

Centrifuga

Materiale pesante sul fondo, materiale leggero in superficie.

La prima centrifuga separa il guscio, le altre separano gli isotopi. Il materiale radioattivo dimostra la presenza del DNA all'interno del batterio.

La seconda centrifuga separa il materiale, secondo l’% del peso radioattivo del DNA.

Isotopi

Sono atomi di uno stesso elemento chimico con lo stesso numero atomico ma con diverso numero di massa.

• Si dividono in: ↔STABILI
• NON STABILI (RADIOATTIVI)

La differenza nel numero di massa dipende dal numero diverso di neutroni presenti nel nucleo.

Sono forme diverse di uno stesso elemento. Hanno le stesse proprietà chimiche e occupano la stessa posizione nella tavola periodica.

Si differenziano per le proprietà fisiche perché hanno masse diverse.

Isotopi del Fosforo:

• ³¹P (stabile) ↔ 16 neutroni, 15 protoni
• ³²P (radioattivo) ↔ 17 neutroni, 15 protoniViene usato nella ricerca biochimica come tracciante per DNA ed RNA
• ³³P (radioattivo) ↔ 18 neutroni, 15 protoniViene usato nella ricerca biochimica come emittitore di raggi beta a bassa energia

Isotopi dello Zolfo:

• ³²S (stabile) ↔ 16 neutroni, 16 protoni
• ³³S (stabile) ↔ 17 neutroni, 16 protoni
• ³⁴S (stabile) ↔ 18 neutroni, 16 protoni
• ³⁵S (radioattivo) ↔ 19 neutroni, 16 protoni

DNA

DNA e RNA sono acidi nucleici composti da:

• Gruppo fosfato
• Zucchero
• Base azotata

Basi Azotate

Sono:

• Adenina (purina)
• Guanina (purina)
• Citosina (pirimidina)
• Timina (nell'RNA è sostituita dall'uracile) (pirimidina)

Si dividono in:

• Purine (adenina e guanina)
  • Anello eterociclico a 6 e uno a 5
• Pirimidine (citosina, uracile e timina)
  • Anello a 6

Zucchero

È un pentoso con 5 carboni. Nel DNA è il desossiribosio mentre nell'RNA è il ribosio.

Gruppo Fosfato

I nucleotidi possono avere 1, 2 o 3 gruppi.

Rende la molecola acida

Può essere in posizione 5' e 3'

Nuccleosidi e Nuccleotidi

• Nuccleosidi: unione tra uno zucchero e una base azotata
• Nuccleotidi: unione tra uno zucchero, una base azotata e un gruppo fosfato

Base

• Adenina
• Guanina
• Citosina
• Timina
• Uracile

Nucleoside

• Adenosina
• Guanosina
• Citidina
• Timidina
• Uridina