Patologia generale

UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI FOGGIA

CORSO DI LAUREA T.L.B.

a.a. 2006/2007

Scienze tecniche di medicina e di

laboratorio 5

Docente: Nicoletta Mangialetto

PROGRAMMA DEL CORSO

Prelievo di sangue e striscio periferico;

Prelievo di midollo osseo e apposizione;

Colorazione di May Grunwald’s – Giemsa;

Immunofissazione: tecniche di laboratorio;

Principi di citofluorimetria a flusso: immunofenotipizzazione

linfocitaria(principio e metodo);

Tecniche di citochimica in ematologia:

PAS o reazione dell’Acido Periodico- Schiff

• Reazione di PERLS

• Mieloperossidasi (MPO)

• Esterasi (Naftil- Naftol)

• Fosfatasi Alcalina Leucocitaria (FAL)

• Fosfatasi Acida Leucocitaria

•

Emoglobina

Metodi di determinazione mediante elettroforesi ed HPLC

• Principio analiico degli HPLC

• Interpretazione dei cromatogrammi

• Emoglobine normali umane (Hb A1- Hb A2- Hb F- Hb A1C)

•

Emoglobinopatie

Hb anomale per alterata struttura (Hb S, Hb C, Hb D, Hb

• instabile)

Hb anomale per diminuita velocità di sintesi( ά-talassemia, β-

• talassemia, δ-talassemia)

Interpretazione nei cromatogrammi dei picchi anomali

•

Tecniche di esecuzione dei seguenti test:

Test della falcizzazione

• Test per la determinazione delle Hb instabili

• Test delle resistenze globulari

• Test dell’autoemolisi

• Test di Ham

• Metodi di determinazione delle porfirine urinarie.

•

FASI DELL’ANALISI DEL SANGUE

FASE PRE- ANALITICA

Richiesta dell’esame

 Preparazione del paziente

 Prelievo venoso

 Raccolta e conservazione dei campioni

 Preparazione degli strisci



FASE ANALITICA

FASE POST- ANALITICA

Prelievo venoso

Generalmente eseguito nelle vene della regione anteriore del gomito, alternativamente

sul dorso della mano.

Siringa classica Vacutainer

- Aspirare ed immettere il sangue -Velocità di aspirazione relativa

nelle provette lentamente, per evitare alla pressione negativa delle

fenomeni emolitici. provette;

- Vantaggi: rapporto standard

sangue/ anticoagulante;

ridotto rischio trasmissione

malattie;

- Svantaggi: maggior costo del

materiale.

Non appena il sangue fluisce nella siringa o nella provetta, togliere il laccio emostatico.

Esecuzione del prelievo venoso

Poggiare il braccio del paziente su una superficie per

 evitare uno stato di tensione muscolare;

Disinfettare accuratamente la zona sottoposta a

 prelievo;

Applicare,sopra la piega del gomito, il laccio emostatico

 per favorire la dilatazione venosa una stasi venosa

superiore ai 3 min provoca alterazione nei conteggi

cellulari.

Prelievo tramite siringa classica o metodo vacutainer

 (più moderno e più utilizzato).

Preparazione degli strisci

Depositare una goccia di sangue a circa 1 cm dal

 bordo del lato minore del vetrino portaoggetti

Far aderire un altro vetrino al precedente con una

 inclinazione di circa 45° in modo che il sangue si

distribuisca lungo la linea di contatto;

Far scivolare il vetrino inclinato sul vetrino

 portaoggetto in modo che il sangue si distribuisca

uniformemente.

In uno striscio ben fatto la distribuzione deve essere uniforme:

In uno striscio troppo In uno striscio troppo

sottile: spesso:

leucociti neutrofili e le emazie si sovrappongono

monociti occupano i rendendo difficile la loro

margini e la coda dello valutazione morfologica,

striscio nonché la dotazione in Hb

e la visione quantitativa e

Linfociti occupano la zona qualitativa delle piastrine.

centrale

ORGANI EMOPOIETICI

Midollo osseo Organi deputati alla

formazione

Linfonodi delle cellule del sangue

Milza (in casi particolari) nell’adulto

Il midollo osseo, localizzato nelle parti più centrali dell’osso, ha un

peso totale di 3-4 kg quotidianamente produce:

2,5 x 10¹² eritrociti

 2,5 x 10¹² piastrine

 1 x 10¹² leucociti



per Kg di peso corporeo, con produzione variabile in base alle

esigenze individuali.

Prelievo del midollo osseo Agoaspirazione

L’ agoaspirazione viene praticata in varie sedi in base all’età del

paziente:

Cresta iliaca anteriore superiore adulti e

 bambini,pratico da eseguire

Sterno(2º 3º spazio intercostale) adulti

 Processi spinosi delle vertebre adulti

 Superficie antero-mediale della tibia bambini fino a 3

 anni

In sede sternale il prelievo è più difficoltoso poiché lo sterno ha

uno spessore di circa 1 cm.