Analisi dei medicinali I

Colonnes in impaccate e in capillari

può avere uno spessore compreso tra 0,1 e 5 μm. Il rivestimento più adoperato prevede polimeri organosilossanici, legati a loro volta chimicamente ai gruppi silanolici sulla parete della colonna, essendo le catene polimeriche ulteriormente reticolate e legate tra loro (cross-linked).

FSOT: (= colonne tubolari aperte a silice fusa); sono le + usate; le più utilizzate hanno diametri interni che variano da 0,32 a 0,25 mm. Realizzate in silice fusa, di solito rivestite con poliammide per conferire loro flessibilità. Hanno sostituito in molti casi le WCOT e le SCOT, essendo le SCOT ancora adoperate quando si deve lavorare ad alte temperature. Le fasi legate alla parete sono stabili fino a 325 °C e alcuni tipi di rivestimento sopportano anche temperature di 370 °C.

I polimeri a base non siliconica, come carbowax, non possono essere legati nello stesso modo alla parete della colonna per questo motivo, in questi casi, tali colonne risultano meno stabili alla temperatura.

Infatti, la temperatura massima consentita per colonne capillari carbowax è di circa 240 °C.

In GC capillare il gas di trasporto più usato è elio, con un flusso compreso tra 0,5 e 2 mL/min.

Dato che il flusso che fuoriesce dalla colonna è minore di quello che sarebbe necessario per riempire il volume interno del rivelatore, spesso è necessario aggiungere un gas (detto di make-up) al flusso di gas in uscita dalla colonna, per trascinare il campione al di fuori del rivelatore a una velocità accettabile.

Su una colonna capillare vengono caricati circa 100 ng per componente.

CONFRONTO - Aumentando il diametro si riduce efficienza/risoluzione. - Aumentando lo spessore del film di liquido sulla fs aumentano i tempi di ritenzione.

Fasi stazionarie in GC

CARATTERISTICHE FASI STAZIONARIE LIQUIDE

Bassa volatilità (p.e. almeno 100 °C superiore alla temperatura massima di operazione della colonna; stabilità termica; inerzia chimica;

caratteristiche di solvente tali da consentire di avere parametri a e k adeguati).

Fasi stazionarie polari contengono gruppi funzionali quali –CN, -CO, -OH.

✓ Fasi stazionarie non polari contengono idrocarburi o dialchilsilossani (separano i✓ composti su t.e.)

Fasi stazionarie molto polari sono a base di poliesteri.

✓Analiti polari sono alcoli, acidi e ammine, soluti a media polarità includono eterialdeidi e chetoni, mentre gli idrocarburi saturi sono apolari.

Struttura glicole

Struttura polietilenicopolidimetilsilossani

Nel polidimetilsilossano R = CH 3

Nei derivati seguenti oltre a gruppi metile compaiono R = -C H oppure –C H CF oppure –6 5 3 6 3C H CN

La % indicata in tabella si riferisce alla % di gruppi metilici che hanno subito la modifica nella specie R indicata.

Poiché gli enantiomeri possiedono proprietà fisiche uguali, non possono essere separati con le colonne GC convenzionali. Tuttavia, se gli analiti chirali interagiscono con un

La polarità della colonna è data dalla costante di McReynold, basata sui tempi di ritenzione di benzene, n-butanolo, pentan-2-one, nitropropano e piridina su una particolare fase. Più la costante di McReynold è alta, più polare è la fase. Molte fs sono classificate in base al numero OV; maggiore è il numero dopo OV e più polare è la fase.

Derivatizzazione analita in GC

Questo approccio è necessario per composti altamente polari per raggiungere una buona simmetria del picco cromatografico evitando scodamenti. Ad es. pseudoefedrina da sciroppo decongestionante, trattato con ammoniaca ed estratti i p.a. con acetato di etile, oppure glicerolo ed agenti sigillanti.

Parametri che regolano le prestazioni in GC

SI usano idrogeno o elio con portate ddi 30-50 cm/s, la portata ottimale per azoto è di 10-20 cm/s. La portata del gas diminuisce con aumentare della temperatura e questo può

influenzarel'efficienza della colonna. Gli strumenti moderni sono dotati di programmatori di flusso inmodo che questo possa essere impostato per rimanere costante al crescere dellatemperatura.

TEMPERATURA DELLA COLONNA

Al crescere della T della colonna diminuisce il grado di risoluzione di due componenti, datoche il grado di interazione con la fs viene ridotta all' aumentare della tensione di vaporedegli analiti. T più basse portano a migliore risoluzione.

LUNGHEZZA DELLA COLONNA

La capacità di separazione di una colonna varia come la radice quadrata della sualunghezza. Di conseguenza, se è necessario un aumento della risoluzione pari a 2 voltequella ottenuta, la lunghezza della colonna dovrebbe aumentare di 4 volte. Questocomporta un quadruplicarsi del tempo di analisi. È preferibile abbassare la T di lavoro.

SPESSORE DEL FILM E CAPACITÀ DI CARICO

Maggiore è il volume di fs e maggiore sarà la ripartizione in essa del soluto.

Velocità di diffusione dell'analita nelle fasi gassose e liquide- U: velocità del gas di trasporto 482.

CROMATOGRAFIA LIQUIDA AD ALTA PRESTAZIONE

L'HPLC è una tecnica ampiamente usata nel campo delle analisi quantitative dei principi attivi contenuti nelle forme farmaceutiche.

STRUMENTAZIONE

• Eluizione isocratica: fm a un solo solvente o a miscela di solventi a composizione costante
• Eluizione a gradiente: fm come miscela di almeno 2 solventi, le cui concentrazioni vengono fatte variare in modo programmato durante la separazione
• Pompa a siringa (priva di impulsi, flusso facilmente controllato, scarsa capacità (250mL) e non adatta per eluizioni a gradiente
• Pompa reciprocante, camera cilindrica riempita e svuotata mediante pistone, producendo un flusso pulsato successivamente smorzato. Adeguate a eluizione a gradiente, mantenendo velocità di flusso costanti.
• Pompa pneumatica costituita da un contenitore di solvente

comprimibile, collocato in un contenitore che possa essere pressurizzato da un gas compresso. Poco costose ma capacità di uscita limitate, velocità e pressione di pompaggio in funzione della viscosità del solvente. Non adatte a eluizioni a gradiente.

Serbatoio solvente, in genere di vetro con capacità 500 mL.

Pompa per spingere il solvente fino a pressione di 4000-6000 psi con flussi fino a 10 mL/min. Resistenti alla corrosione da parte di diversi solventi.

Loop di iniezione dalla capacità compresa tra 5 e 500 mL.

Colonna in genere costituita da un tubo di acciaio impaccato con gel di silice derivatizzato, in genere con octadodecil-silano (ODS-coated) dal diametro medio di 3,5 o 10 mm.

Collegamento ad opportuno rivelatore e relativa Integrazione con un