Relazione biologia molecolare

Alessio Massimi, gruppo 1

RELAZIONE DELL’ESERCITAZIONE DI BIOLOGIA MOLECOLARE

L' esercitazione si basava sull' analizzare il risultato di un clonaggio batterico

precedentemente svolto. Nella prima parte si è verificata la presenza

dell’inserto nel DNA plasmidico tramite confronto con campioni noti e si è fatta

una stima qualitativa mediante elettroforesi su gel di agarosio. Nella seconda

parte si è quantificato il quantitativo di DNA del campione mediante

spettrofotometria.

ELETTROFORESI I:

Dopo che abbiamo preparato il DNA plasmidico prelevandolo dalle tre colonie

trasformate: colonia A (vettore di controllo senza inserto), colonia C (vettore di

controllo con l’inserto) e colonia B (plasmide da determinare) abbiamo fatto

un’analisi qualitativa mediante elettroforesi. Dal risultato del caricamento

(visibile nella foto sottostante) possiamo vedere, confrontando l’intensità di

fluorescenza della banda del campione estratto dalla colonia B con quella

della banda del marcatore, che l’intensità di B è circa il doppio di quella del

marcatore. Questo confronto porta ad una stima approssimativa del peso

molecolare: sapendo che la quantità di DNA nel marcatore è pari a 200

nanogrammi (da protocollo), quella nel campione B sarà circa 400

nanogrammi. Mettendo invece a confronto la “corsa” del campione estratto

dalla colonia B sul gel rispetto agli altri due campioni estratti dalle colonie A e

C si può dedurre che il campione ignoto (B) contenga l’inserto poiché la

banda di migrazione di B e C sono allineate nella parte alta della figura.

Mentre il campione estratto dalla colonia A non avendo l' inserto ha avuto un

cammino maggiore. M A B C

SPETTROFOMETRIA:

Per ottenere un risultato più preciso e affidabile rispetto a quello ottenuto con

l’elettroforesi abbiamo cercato di calcolare la quantità di DNA ottenuto

dall’estrazione, mediante spettrofotometria. Non siamo però riusciti a

calcolare la quantità esatta di DNA estratto poiché il rapporto tra assorbanza