Tecniche e allestimento dei campioni istologici
Unità di misura
20 µm, 1 x 5 µm, 7 nm, 2 nm, 25 nm
Le tecniche microscopiche
Permettono di osservare strutture troppo piccole per essere osservate ad occhio nudo. Lo studio della morfologia e dell'organizzazione strutturale di cellule e tessuti è fondamentale per comprenderne il funzionamento. L'istologia dipende dall’impiego dei microscopi.
Microscopi
Possiamo dividere i microscopi a seconda del tipo di onda utilizzata per visualizzare le immagini:
- Microscopi ottici: Utilizza la luce
- Microscopi elettronici: Utilizza un fascio di elettroni
Microscopia ottica
Vantaggio: la luce è poco distruttiva
Limite: pochi dettagli
Microscopia elettronica
Vantaggio: si osservano strutture molto più piccole di quelle che è possibile risolvere con la luce visibile
Gli svantaggi includono la preparazione dei campioni, che è molto più complessa, e la difficoltà di essere sicuri che ciò che vediamo nell’immagine corrisponda precisamente alla struttura reale esaminata.
Il primo microscopio ottico
Un microscopio semplice del 1665 di Robert Hooke.
Un moderno microscopio
Fotocamera o telecamera, oculari, revolver con obiettivi, stativo, tavolino, fonte di traslatore di illuminazione, condensatore, diaframma, vite macrometrica di campo e micrometrica.
Sistema di lenti
- Lente dell’obiettivo raccoglie la luce e mette a fuoco il condensatore
Osservazione al microscopio
È condizionata dai seguenti parametri:
- Potere di risoluzione: la distanza minima alla quale due punti risultano distinti
- Ingrandimento: rapporto tra la dimensione dell’immagine vista al microscopio e quella dell’oggetto osservato
Il potere di risoluzione massimo di un microscopio ottico è di circa 0,25 µm.
Un fascio di luce attraversa il campione da osservare e l’immagine passa per una serie di lenti e giunge ingrandita all’osservatore. Quindi il materiale da osservare deve essere trasparente: non più spesso di una singola cellula.
Microscopia ottica
- Campo scuro
- Campo chiaro
Microscopia in campo chiaro
Il più diffuso: poco costoso, facilmente trasportabile, fornisce molte informazioni sulla struttura di cellule, tessuti ed organi. Si possono studiare cellule viventi e piccole parti di tessuti o di organi. Limiti: dimensioni del preparato, risoluzione, ingrandimento e contrasto.
Preparati in campo chiaro
- 1. Su un vetrino porta-oggetto si pone una goccia di acqua o soluzione fisiologica
- 2. Il materiale da osservare viene posto sulla goccia ed osservato
Preparati in campo chiaro: batteri, cellule.
Microscopia ottica a contrasto di fase
Gli oggetti visti in campo chiaro hanno poco contrasto. Per migliorare il contrasto, è possibile sfruttare le lievi variazioni di tono.
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