Scienze, tecniche di microbiologia

SCIENZE TECNICHE DI MICROBIOLOGIA

Classificazione microrganismi per gruppo di rischio:

1. nessun rischio o basso

2. rischio individuale, basso rischio collettivo

3. elevato individuale, basso collettivo

4. elevato individuale e collettivo

Livello di sicurezza e cappa:

1. base, per insegnamento e ricerca, banco da lavoro

2. DPI + cappe per procedure che producono aerosol

3. DPI speciali + cappe per tutte le procedure

4. patogeni pericolosi + doccia decontaminazione + cappe livello III

Cappa chimica: con filtri di carbonio che neutralizzano sostanze nocive, usato per reagenti o soluzioni chimiche

pericolose

Cappa biologica: per tutelare il lavoratore dal campione e protegge campione da decontaminazione (con aerosol)

Emocoltura: presenza di batteri in circolo sanguigno, per cui deve essere disinfettata la cute altrimenti l’ ago in

contatto con i batteri della cute preleva anche quelli (che non sono presenti nel sangue) e danno un falso positivo

nella capsula --> contaminazione

Simboli di pericolo:

tossico, causa danni acuti o cronici a organismi

ossidante, rilascia ossigeno che accelera combustione

corrosivo, sostanza chimica che altera tessuti organici

infiammabile, si infiamma facilmente

esplosivo, esplode facilmente

irritante o nocivo, effetto infiammatorio su tessuti attraverso contatto

☣ biohazard, il rischio biologico

Dispositivi di protezione individuale: DPI

Diagnosi di laboratorio: analisi di laboratorio--> flusso di dati--> interpretazione medico base--> trattamento e

diagnosi --> riguardano analisi risultati

Diagnosi microbiologica:

- Identificazione agente infettante, prelievo dei campioni, prima della terapia antibiotica. Trasporto campioni

in laboratorio deve avvenire per tempo e condizioni da non alterare caratteristiche del materiale patologico

(es. In urina si riproducono batteri e cambiano condizioni)

- Determinazione sensibilità agli antibiotici

Diagnosi batteriologica:

- raccolta campione e prelievo (urinocoltura, emocoltura, coprocoltura, liquor, tamponi)

- Esame microscopico: osservazione a fresco, colorazione dei Gram, colorazione di ziehl-Neelsen (per

micobatteri alcol acido resistenti)

Colorazione Gram: Gram+ si colora con il primo, cristalvioletto, che permane perché la parete è più

spessa, mentre i Gram- si decolorano con l' alcol per poi colorarsi di safranina (se si decolora per troppo

tempo i gram+ diventano -), lo iodio è un mordensante e serve per rafforzare il colore

Urinocoltura: prelievo con prima pulizia locale ed eliminare il primo getto prendendo il mitto intermedio

Diluisco urina e la metto in piastra su terreni selettivi e differenziali; in base ai valori sappiamo se c’è infezione o

meno e possiamo poi identificare i batteri presenti

Terreni:

- Di arricchimento: mi permette di far crescere qualsiasi specie batterica

- Selettivo: inibiscono alcuni tipi di batteri e ne favoriscono altri

- Differenziali: in una specie abbiamo + tipi di batteri, possiamo selezionarli

Tappo svitato e porzione bianca immersa (contenente terreno)

-->a incubare a 37°C x 24h e si ha formazione di colonie (se è sterile no colonia)

Davanti terreno CLED Agar, selettivo x specie presenti in urine

Dietro terreno MacConkey Agar x Gram-

Abbiamo anse di diverse dimensioni:

- Piccola, prende meno materiale ma faccio una semina + distribuita e selettiva

- Grande, da usare con materiali poco concentrati e prende + campione

In urinocoltura bisogna fare anche indagine macroscopica quindi:

- Trasparenza e torbidità delle urine (con proteine e gr)

- Colore (giallo/giallo chiaro/ambra--> ittero o altre patologie/rosso o marrone-->emolisi gr)

Emocoltura: ricerca dei batteri presenti nel sangue

--> va fatta prima della terapia antibiotica e prima del rialzo febbrile

Solitamente si fanno 3 set di emocoltura, se solo 1 flacone è positivo indica presenza di un contaminante, se +

emocolture sono positive --> infezione del torrente circolatorio

3 set ottimizzano la sensibilità: vengono usate delle bottiglie per l’emocoltura + sostanze in esse

• Bottiglie:

- Azzurro/verde acqua x evidenziare aerobi

- Rosso x crescita anaerobi

-->il batterio produce CO2 misurata da sensore presente nella macchina, quando si ha positività si prende il

campione e si fa la semina su piastra --> si identifica colonia e si fa antibiogramma

• Sostanze in esse:

− Anticoagulanti, altrimenti si formano coaguli e i batteri sono intrappolati in esso e non crescono

− Carbone attivo x pazienti in terapia antibiotica e lo assorbe consentendo recupero di microrganismi

I flaconi principali sono i BacT/ALERT

-->volume preso è di 30/40 mL x adulti

--> 20 mL per i bambini, essendo + piccoli e avendo minor volume di sangue

In caso di crescita batterica, l’aumento della concentrazione di CO2 provoca variazione di pH (si abbassa, acido)

--> cambia colore dell’indicatore --> BACT ALERT

Microrganismi indicativi di batteriemia sono: Staphilococcus, Listeria, Bacillus, Pseudomonas, Brucella, E. coli

Per aumentare probabilità di isolamento bisogna:

- Fare prelievo prima del rialzo febbrile

- Eseguire prelievi ripetuti nel corso della giornata (almeno 3)

- Inoculare 2 bottiglie x aerobi e anaerobi (+1 x miceti negli immunocompromessi)

Quando bottiglia suona positiva si fa coltura, dalla bottiglia, nel terreno si estrae una goccia e si esegue striscio

Abbiamo 2 tipi di bottiglie:

• Aerobia x Gram --> si semina in: blood Agar, Chocolate Agar Co2, MacConkey Agar

• Anaerobia x colorazione Gram --> si semina in blood Agar

-->si ottiene colonia batterica (clone di tante cell batteriche facenti parte della stessa specie batterica) su cui si fa

test (es. Antibiogramma, serve colonia singola e pura)

Diagnosi di laboratorio: eseguito in laboratorio, la qualità richiede monitorazione e azione correttiva del ciclo

Coprocoltura: ricerca di germi e batteri nelle feci

- Consistenza feci (7:da palline, a salsiccia, a liquida-->diarrea)

La normale flora contenuta nel tratto gastro intestinale contiene:

Gram- (E. Coli, enterobatteri, pseudomonas, ecc)

Gram+ (clostridia, lactobacilli, enterococci, ecc)

Per i batteri aerobi si fa coltura con Agar:

- XLD AGar per Salmonella e SHigella

- TCBS Agar per cholera

- MacConkey per Yersinia enterocolitica

- Compylobacter cultur media per Campylobacter specie

Liquor (LCR) liquido sterile

-->prelievo: puntura lombare con trasporto immediato, no refrigerazione (senno uccide Nesserie)

--> se liquido è denso è ricco di cellule o proteine

Se cerchiamo batteri --> temperatura ambiente

Se cerchiamo virus --> temperatura refrigerata a 4°C (si inibisce crescita batterica)

Infezione virale aumentano linfociti

Infezione batterica aumentano neutrofili

Tampone vaginale e uretrale

Prelievo: 3 tamponi dall’ambiente vaginale prima della minzione

- Per esame microscopico a fresco (protozoi e funghi)

- Per esame microscopico con colorazione

- Per esame colturale

Tampone nasale x ricerca S. Aureus

Tampone faringeo x Streptococcus, Staphylococcus, Candida, ecc

Tampone rinofaringeo: prelievo con tampone sottile montato su un filo di alluminio attraverso narice x

Mycolplasma, neisseria, S. aureus, ecc

Tampone auricolare x otiti es, t