Struttura e Funzione dell'apparato Riproduttore - Appunti

TECNICHE DI MICROSCOPIA

• MICROSCOPIA OTTICA
  • MICROSCOPIO OTTICO A LUCE TRASMESSA
  • MICROSCOPIO A FLUORESCENZA

ALLESTIMENTO DI UN PREPARATO ISTOLOGICO

1. PRELIEVO
   • Fatto nel migliore dei modi
   • devo sapere il tipo di indagine
     • se devo studiare le proteine posso trasportare a T ambiente
     • se devo studiare RNA devo immergere in fissativo a 0-0°C
   • devo usare es. affettatrice e
     • a-traumatiche
     • traumatiche con dettagli
   • le campione deve avere dimensioni inferiori al cm³

TECNOLOGIE DI MICROSCOPIA

• MICROSCOPIA OTTICA
  • MICROSCOPIO OTTICO A LUCE TRASMESSA
  • MICROSCOPIO A FLUORESCENZA

ALLESSTIMENTO DI UN PREPARATO ISTOLOGICO

1. PRELIEVO
   • Fatto nel migliore dei modi
   • Devo sapere il tipo di indagine
     • se devo studiare le PROTEINE posso trasportare a T ambiente
     • se devo studiare l'RNA devo immergere in fissativo a 0-0°C
   • Devo usare es. affettatrice e
     • a-traumatiche
     • traumatiche con dettagli
   • Le campione deve avere dimensioni affettate al cm³

2. Fissazione

È fondamentale perché da questa deriva il resto.Lo scopo è di impedire la degradazione dei tessuti.Serve per mantenere il quadro strutturale inalterato.La fissativa va in base alla natura dei tessuti ed al tipo di indagine.

Ausiliari

• Cross-legano i componenti tessutali
  • Proteine
  • Acidi nucleici
• Fissativi progressivi
  • Più teniamo il campione, più aicompromessi
  • Permanano i lacci - legami
  • No immunocolora si morfologia

• Formaldeide 37%: è diluita con PBS _(pungi) contiene10-15% di metanolo
  • No ibridezione in situ
  • Pararformaldeide 4% per rna

• Miscele Fissative
• Zamboni che depecato acidinocicli

NB: se si tiene il campione più di 24 ore in fissativo non si possono fare determinati analisi

• congelamento del preparato il più velocemente possibile così si formano cristalli piccole
• metodo molto rapido
• oppure congelato può già tagliare le campione
• la base per trattare quelli che si deteriorano con il normale fissativo

N2 liquido non è un buon conduttore termico

• campione a -4°C, N2 a -196°C
• grande sbalzo termico che crea una camera di vapore attorno al campione che non si congela velocemente

- Diafantano (buon conduttore)

• viene congelato in N₂ liquido e poi
• il campione viene messo al suo interno
• così congela velocemente

* Regole di fissazione *

1. Scopo del lavoro
   • come devo trattare il campione
2. Temperatura
   • 4°C per rispettare l'attività enzimatica
3. Dimensione
4. pH
   • bisogna mantenere le condizioni fisiologiche
5. Volume di fissativo
   • 1:10 rispetto al campione

3. INCLUSIONI

• tendere il pezzo di una consistenza tale che possa essere tagliato
  • PARAPLAST
    • polimero plastico
  • PARAFFINA
    • solida a t. ambiente, scioglie con le caldise
      • deve entrare all'interno del
• campione per indurirla
• insolubile in acqua/alcol
• i campioni devono essere disidratati
  • con sostanze intermedie per favorire passaggio da alcol a paraffina
• Xilene
• la paraffina si scioglie a 60°C
  • pero
• se devo osservare le proteine queste si degradano