Relazione Laboratorio di Biologia Molecolare Mod. 1

RELAZIONE LABORATORIO DI BIOLOGIA MOLECOLARE MOD. 1

22 LUGLIO 2020

In questo esperimento ho riprodotto un metodo di estrazione di DNA da cellule di un frutto, in particolare da una banana.

Il metodo è piuttosto semplice ma consta di alcuni passaggi fondamentali.

Prima di tutto mi sono dotato di tutto l'occorrente come visibile in figura:

• 100 g di Banana
• 10 ml di Detersivo per piatti
• Acqua distillata
• 3 g di Cloruro di sodio (Sale da cucina)
• 5 ml Succo di ananas
• Siringhe da 5 ml
• Bilancia pesa alimenti
• Provetta grande da 10 ml
• Contenitori
• Colino

Ho pesato un quantitativo di 100 gr di banana e preparato 100 ml di soluzione di estrazione.

Ho schiacciato con una forchetta la banana fino a renderla una poltiglia omogenea in modo da separare meccanicamente le cellule tra loro.

RELAZIONE LABORATORIO DI BIOLOGIA MOLECOLARE MOD. 1

22 LUGLIO 2020

In questo esperimento ho riprodotto un metodo di estrazione di DNA da cellule di un frutto, in particolare da una banana. Il metodo è piuttosto semplice ma consta di alcuni passaggi fondamentali. Prima di tutto mi sono dotato di tutto l'occorrente come visibile in figura:

• 100 g di Banana
• 10 ml di Detergente per piatti
• Acqua distillata
• 3 g Cloruro di sodio (Sale da cucina)
• 3 ml Succo di ananas
• Siringhe da 5 ml
• Bilancia pesa alimenti
• Provetta grande da 10 ml
• Contenitori
• Colino

Ho pesato un quantitativo di 100 gr di banana e preparato 100 ml di soluzione di estrazione. Ho schiacciato con una forchetta la banana fino a renderla una poltiglia omogenea in modo da separare meccanicamente le cellule tra loro.

Fatto ciò, ho versato il tutto in un contenitore graduato ed ho aggiunto a filo la soluzione di estrazione, appena menzionata, composta da:

• 10 ml di detersivo per i piatti in modo da lisare la membrana cellulare e la membrana nucleare formate da un doppio strato fosfolipidico che vado ad aggredire appunto col detergente in modo da liberare il DNA.
• 3 gr. di NaCl (salting out) in modo da ridurre in aminoacidi le proteine istoniche che tengono avvolto il DNA e farle precipitare sul fondo della soluzione.
• Acqua distillata per solubilizzare correttamente il tutto.

Il tutto per un volume totale di 100 ml.

Ho mescolato il preparato delicatamente in modo da favorire lo scioglimento dei grassi ed evitare la formazione di schiuma. Dopo aver fatto agire il composto per circa 10 minuti, ho usato un colino per filtrare la soluzione in modo da separare l'acido nucleico dai residui cellulari. Ho successivamente prelevato 25 ml di questo filtrato (5 volte con la siringa da 5 ml) e l'ho messo ad agire con 5 ml di succo d'ananas per circa 5 minuti. Il succo d'ananas conferisce alla soluzione un ambiente acido ed ha la peculiarità di contenere bromelina, un enzima proteolitico che contribuisce a scindere in aminoacidi elementari gli istoni che superavvolgono il filamento di interesse.