Microrganismi probiotici: biotecnologie e applicazioni

Termini correlati alla letteratura sui probiotici

Effetto prebiotico. Inizialmente i prebiotici sono stati considerati come molecole "non digeribili", mentre ad oggi possiamo considerare anche quelle digeribili e assorbibili. Si parlava anche di "modulazione selettiva", ma questo è stato rivisto per rendere più semplice il concetto di prebiotico poiché era difficile valutare al meglio la selettività.

Ad oggi abbiamo che tra i prebiotici ci sono soprattutto:

• Inulina (presente anche nelle radici)
• Fruttoligosaccaridi (molecole bifidogeniche)
• Galattoligosaccaridi
• Xilo-oligosaccaridi
• Soia-Oligosaccaridi
• Isomalto-oligosaccaridi
• Pirodestrine
• Palatinosio

Nella definizione non si fa riferimento ai soli carboidrati, però ad oggi la maggior parte di quelli considerati prebiotici sono carboidrati; ad oggi ci sono studi sui polifenoli della dieta che possono avere un effetto prebiotico es. ad oggi c'è molto studio per gli antociani che danno un beneficio all'ospite.

quindi valuto quanto c'è unaprevenzione. Come si fa uno studio di recovery? È uno studio in cui voglio valutare un marcatore di tipo A e il tipo più comune di studio è quello in cui noi vogliamo valutare la resistenza del microrganismo nel tratto intestinale. Questo è molto importante perché il probiotico per definizione nelle linee guida delle sue caratteristiche deve presentare questa caratteristica.

Nel caso studio il prodotto usato è uno dedicato anche molto ai bambini e si Lacticaseibacillustratta di una linea tra le più vendute in Italia e contiene il paracasei DG.

Per fare lo studio devono essere fatte diverse fasi:

Lezione 10

Studi di recovery

Lo studio di recovery viene attualmente molto richiesta da chi possiede dei probiotici. Le fasi sono 4.

Ogni volta che lavoro con microrganismi viventi per fare i trial con animali o persone devono necessariamente passare da un comitato etico in tutti i casi, infatti è molto

Importante anche la gestione dei dati e della privacy, per cui tutte le persone coinvolte devono essere correttamente informate.

Nello studio in questione si è visto se L. Paracasei GG può attraversare il tratto intestinale e rimanere vivo e l'esame è fatto somministrando il microrganismo alle persone e poi deve essere ritrovato vivo all'interno delle feci; questo non è molto semplice perché nel nostro organismo non abbiamo le condizioni più idonee per la loro sopravvivenza.

In questo caso il problema potrebbe essere però di sensibilità perché questo prodotto ha dosaggio basso.

La prima cosa fatta in questo caso è stato andare a fare un'analisi di genomica comparativa per analizzare il genoma di questo batterio; studiando il genoma con la comparative genomics posso vedere le caratteristiche uniche del mio ceppo per poterlo distinguere da tutti gli altri ceppi.

La regione più interessante è quella

EPS-b, infatti questa regione la ha solo il DG; questa regione genica ha una particolare organizzazione, che è propria delle regioni che codificano per esopolisaccaridi. Dalla ricerca in genbank di questa regione è risultato che questa regione che codifica per l'esopolisaccaride ha una parte unici, centrale fatta da 5 geni che sono e sono tutti coinvolti in questa funzione. Questa regione è contenuta tra due geni trasposasi, che sono elementi genetici mobili quindi questi geni potrebbero essere stati acquisiti per trasferimento genico orizzontale. Il batterio può quindi produrre un esopolisaccaride unico (prodotto solo da questo ceppo) era costituito da un monomero fatto da 6 zuccheri che contengono ramnosio, n-agetil-galattosammina, ramnosio e galattosio in sequenza ripetuta; esso è importante perché dà al batterio due caratteristiche uniche:

• Resiste agli antibiotici, perché ha molto esopolisaccaride e quindi rende più difficile

La penetrazione- In presenza di antibiotici la colonia acquisisce un aspetto particolare 85I valori aggiunti sono molto inferiori al breakpoint, ma questa quantità è sufficiente per far modificare la consistenza completamente alla colonia: con questo terreno di coltura posso ottenere sulle piastre una certa selettività perché mi crescono solo i batteri lattici che sopravvivono a vancomicina e kanamicina e dopo che ho le colonie posso semplicemente usare delle ansee toccare le colonie e possiamo vedere una sorta di "elasticità" nelle colonie di DG.

Le colonie cresciute su piastra vengono raccolte e viene fatta una PCR di colonia: viene tenuta la colonia a temperature molte alte per un po' di tempo, la cellula si rompe, esce DNA e posso fare una PCR amplificando quella regione unica per vedere se realmente si tratti di DG (ma anche su un plasmide con una sequenza unica).

Se sommiamo il fenotipo (sviluppo nel terreno selettivo) al genotipo (con

La PCR) otteniamo una capacità di riconoscimento del batterio molto elevato, quindi nelle feci delle persone posso andare a riconoscere il ceppo in modo molto specifico. Nella seconda fase si preparano degli schemi. In questo caso è stato dato per 7 giorni il probiotico e vengono prelevate periodicamente le feci; a noi interessa soprattutto il wash-out, infatti io voglio vedere il mantenimento del batterio nell'intestino. Inizialmente voglio vedere la resistenza del batterio nel transito gastro-intestinale e poi la persistenza in esso. 86 Questo studio è pilota, in aperto (la persona sapeva che prende il probiotico e senza placebo), con singolo braccio.

Lo studio nel dettaglio è descritto con una e prima di tutto vanno endpoint fissati gli obiettivi che sono gli e ne abbiamo di primari (ipotesi confermata o meno) e secondari (anche detti esplorativi). In questo caso vogliamo vedere prima di tutto che il probiotico resiste nell'intestino, ma come

obiettivo secondario si volevano vedere se c'è una modificazione nelle abitudini fecali, ma anche se il prodotto è sicuro e tollerabile (bisogna registrare se ci sono problemi, come dolori addominali, ecc. ricondotti all'assunzione del probiotico e possiamo fare considerazioni se molte persone hanno lo stesso problema).

Dopo aver fatto la sinossi mando tutti i documenti che ho preparato al comitato etico. La sinossi deve essere fatta in doppia lingua. Il comitato etico fa tutte le valutazioni del caso con l'aiuto di esperti in varie discipline e ti dice se ciò che è stato proposto è utilizzabile o meno. L'autorizzazione viene data solamente quando è tutto in regola e solamente nel momento in cui c'è un consenso unanime.