Medicina di laboratorio - appunti

Possibile domanda d'esame?

Per la fibrosi quali di questi fattori di crescita sono coinvolti? Se le mesenchimali sintetizzano X fattori, quali di queste attività vengono attivate?

Invece qui nell'ultima immagine vengono riportate le condizioni di colture in vitro che devono essere utilizzate per garantire il differenziamento delle mesenchimali in altre linee cellulari. Non solo si differenziano in cellule dello stesso foglietto embrionale (mesodermico, condrociti, osteoblasti, adipotici) ma anche in un senso endodermico quindi in neuroni e cellule biliari oppure endodermico in epatociti.

Possibile domanda d'esame? Quali diversi mix di crescita inducono il differenziamento lipogenico? Se voglio un differenziamento osteoblastico quali fattori di crescita devo usare? (All'esame saranno in inglese)

Comunicazione tra cellule: possiamo avere comunicazione diretta tramite giunzioni Gap per esempio quindi mettendo in comune un elemento che si scambiano oppure comunicazione

strato lipidico con fosfolipidi in membrana e contenuto in proteine e oligonucleotidi.

• Microvescicole
• Corpi apoptonici: doppio strato fosfolipidico e contenuto informativo

Queste vescicole possono arrivare e trasferire il loro segnale all'interno di una cellula tramite:

• Endocitosi: entrano intere e rilasciano all'interno il loro contenuto
• Fusione di membrana: la fondono la loro membrana con la membrana plasmatica e rilasciano il contenuto
• Docking: interazione della particella con un recettore

SAPERE BENE LE DIMENSIONI NELL'IMMAGINE PER L'ESAME!

In questa immagine dettagliata di un esosoma vediamo che contengono un doppio strato fosfolipidico e dei recettori CD9-CD69-CD81 che caratterizzano gli esosomi e che contengono proteine, microRNA o mRNA.

L'esosoma può essere considerato una sorta di e-mail perché contiene recettori che ci dicono che è un esosoma e mi danno anche segnali che mi dicono a quali cellule devono arrivare.

hanno dei recettori per gli antigeni MHC I e MHC II

Questi mi indicano in modo particolare che hanno una bassa attività di reazione di rigetto e si presentano meglio per l'utilizzo dei trapianti perché hanno pochi di questi recettori quindi non vengono riconosciuti dalla cellula ricevente.

RICORDARE BENISSIMO TUTTI I FATTORI DELLE LEZIONI!!!

Altri fattori da sapere:

• Alix e TSG101 che fanno parte della biogenesi degli esosomi.
• Rabs e Annexins che fanno parte del traffico di membrana.
• Lipidi particolari come flotilina e colesterolo.
• Internamente hanno le Heat Shock Proteins cioè HSP70-HSP90- HSP60.
• Proteine del citoscheletro: actina, tubulina, cofilina, vimentina.
• Fattori di crescita per la trasduzione del segnale: EGFR-EGFR VIII.
• Enzimi: Adams, metalloproteinasi, ATPasi e moltissimi microRNA.

Infine prima di vedere nel dettaglio i miRNA, andiamo a vedere come si sintetizzano perché l'azione degli esosomi

POSSIBILE DOMANDA D'ESAME: il Pri-miRNA si trova nel nucleo o nel citoplasma?

In questa slide andiamo a riportare i principali contenuti degli esosomi che dobbiamo studiare per l'esame!

• CD9
• CD81
• CD63
• TSPAN6
• TSPAN8
• CD151
• CD37
• CD53
• flotilina 1 e 2
• tetraspanine

POSSIBILE DOMANDA D'ESAME? CD63 a quali delle categorie appartiene? Organizzatori di

• Proteine di membrana: coinvolte nella comunicazione cellulare e nel trasporto di sostanze attraverso la membrana.

• Perossidasi, piruvato, chianse, enalase e GPDH: enzimi presenti nel lume della membrana.

• Chinasi, beta-catenina G: proteine coinvolte nella trasduzione del segnale.

• ALIX-TSG101, ubiquitina, clatrina, VPS32, VPS4: fattori per la biogenesi e la secrezione degli esosomi.

• HSP70, HSP90: proteine chaperones.

• MicrorRNA, mRNA e l'istone: contenuto principale degli esosomi.

Gli esosomi sono vescicole secretate dalle cellule tumorali che contengono informazioni e agiscono sulle cellule tumorali stesse e sul sistema immunitario.

Studiare la tabella.

• TGFbeta e microRNA: abbiamo un'attivazione delle cellule CD4.
• TNFalfa, TRAIL e Fast: allora vanno a ridurre l'attività delle cellule CD8.
• TGFbeta e GM-CSF: allora vanno a ridurre il differenziamento della cellula dendritica.
• TGB beta: vanno a ridurre la citotossicità delle cellule NK ma va anche ad attivare i macrofagi di tipo M1 infiammatorio, attivano tutti i polimorfonucleati bloccando il loro differenziamento e vanno a modificare e bloccare la sintesi delle cellule CD4Tregs.

Poter analizzare in maniera diversa il loro singoli componenti, in questa tabella andiamo a vedere quali sono le strategie che devono essere utilizzate per analizzare le proteine per le quali si farà un'analisi di quantificazione totale che ci da quante proteine ci sono o con le tecniche di immunoaffinità che ci dice quali sono.

• Quantità di RNA e di DNA: può essere calcolata con una quantificazione totale o con un profilo molecolare.
• Tipologia di lipidi sono presenti: analisi dei metaboliti e dei lipidi con la metabolomica o la lipidomica in cui facciamo un'analisi quantitativo generica e qualitativa.
• Tecniche emergenti sugli esosomi che mi permettono di isolarli separatamente e analizzandolo nel dettaglio oppure di analizzare se c'è uno scambio di ioni attraverso la membrana plasmatica.

Applicazioni cliniche degli esosomi in vivo:

• Asma: è un'infiammazione costante a livello dei polmoni e

• Coliti infiammatorie: si ha una forte infiammazione del colon, viene fatta la somministrazione degli esosomi sia per endovena che per ossa tramite acqua in cui gli esosomi vanno a ridurre lo stress ossidativo riducendo l'emieloperossidasi, riducono l'attività della malondialdeide, incrementano la sintesi della superossido dismutasi e l'espressione del glutatione. Vanno a ridurre sulle cellule epiteliali la sintesi dell'ubiquitina e vanno ovviamente a svolgere nella matrice extracellulare che sottende l'epitelio tutta l'attività di una soppressione riducendo TNFalfa- interleuchina1beta-interleuchina 6 e 7.
• Infarto: a livello del cuore svolgono una funzione a livello di tre tipologie di cellule diverse, agiscono a livello di cardiomiociti dove svolgono funzione attraverso il trasferimento dei microRNA210-125 e incrementano la sopravvivenza dei

cardiomiciti riducendo l'apoptosi, incre