Ecotossicologia - NP Poecilia reticulata

Effetti del nonifenolo sull'attività della colinesterasi e carbossilesterasi in guppy maschi (Poecilia reticulata)

Studentessa e docente

Studentessa: Alessia Musanti
Docente: Prof. Carlo Pretti
Università degli Studi di Pisa

Introduzione

Il 4-nonilfenolo (NP) è un inquinante ubiquitario, persistente e facilmente bioaccumulato e i suoi effetti potenziali, sia acuti che cronici, sono presenti in molti animali acquatici. In passato, molti studi pubblicati hanno riguardato principalmente gli effetti estrogenici di NP come un distruttore endocrino. MA il NP può avere effetti dannosi su importanti processi fisiologici senza coinvolgimento dei recettori degli estrogeni.

Ad esempio, l'acetilcolinesterasi (AchE) nel ratto nelle cellule PC12 incubate con NP per 24h è risultata essere inibita significativamente e l'aumento di acetilcolina causa una diminuzione dei recettori colinergici.

Il guppy è da tempo utilizzato come modello animale popolare in ricerca ecologica ed evolutiva nonché in studi comportamentali, ma recentemente è applicato anche come organismo in esami sia in situ sia in laboratorio, per studi d'inquinamento ambientale perché è prontamente disponibile e facilmente gestito per le piccole dimensioni del corpo e per il breve ciclo di vita.

Le ChEs sono una classe di idrolasi generalmente classificate in due classi di enzimi:

• AchE, acetilcolinesterasi
• BchE, butirrilcolinesterasi

Molte pubblicazioni hanno riportato che la forma principale di ChE nel muscolo dei guppy è la AchE, e che questa ha un elevato livello di attività. Questo suggerisce che la AchE nei guppy è un biomarker sensibile alle sostanze inquinanti.

Scopo dello studio

L'obiettivo di questo studio è esaminare gli effetti dell'esposizione a breve termine a NP sull'attività della ChE e della carbossilesterasi (CbE) di guppy maschi. Alcuni inquinanti ambientali che inibiscono l'attività della ChE possono inibire anche la CbE. Dunque, sono state misurate le attività della ChE nel muscolo, nella testa e della CbE nel fegato di guppies maschi esposti a 10, 60, 150, o 300 mgL^-1 di NP per 1, 2, 4, o 7 giorni di trattamento.

Materiali e metodi

Reagenti e animali

• Il NP (94%)
• Il 3-aminobenzoico di etile (MS222)
• L'acetone (HPLC)

La soluzione stock di prova viene preparata sciogliendo NP in acetone. Maschi adulti di guppy, acclimatati in laboratorio ad una temperatura di 28+2°C per 12h e per almeno 7 giorni prima dell'esperimento. I guppy sono stati alimentati ogni giorno con scaglie di cibo asciutto. Per non creare lisciviati, potenziali interferenti endocrini, non sono state usate materie plastiche nell'acquario e nell'impianto idraulico. È stata utilizzata acqua senza cloro.

Disegno dello studio

I pesci sono stati esposti sia a NP a concentrazioni nominali di 10, 60, 150, o 300 mgL^-1, sia di