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Limiti della triplice elica

La triplice elica è ancora solo una idea, non è ancora stata usata nella pratica clinica. Presenta una limitata penetrazione all'interno delle cellule. Sono stati utilizzati anche vettori virali, ma si è visto che possono causare reazioni immunitarie verso il vettore. Sono stati utilizzati anche lipidi cationici e policationi, che funzionano bene in vitro ma non in vivo. Le catene della triplice elica presentano ancora un forte grado di instabilità all'interno della cellula. Un problema aggiuntivo rispetto agli antisenso è la necessità di raggiungere il DNA, che si trova compattato nella struttura cromatinica, associato agli istoni. La triplice elica quindi deve formarsi all'interno di una struttura complessa e compatta, e quindi c'è un problema di accessibilità al bersaglio.

Mechanismo d'azione

Se si riuscissero a superare i limiti della triplice elica, sarebbe possibile ottenere sia un blocco che una

Attivazione dell'atrascrizione genica. Potremmo cioè bloccare la trascrizione di un gene che la sua attivazione, questo dipende se l'atriplice genica va a formarsi su un promotore genere, in questo caso avremmo il blocco del complesso di inizio dell'atrascrizione e quindi l'inibizione dell'espressione del gene; se la triplice elica andasse a formarsi nel sito di regolazione a livello di un repressore, impedendone il funzionamento, in quel caso si può arrivare alla stimolazione di quel gene. Posso attivare in caso di una patologia che porta ad una downregulation, posso bloccare in caso di patologia di sovraespressione. Tutto molto bello ma ancora nessuna applicazione clinica funzionante.

APTAMER. Come bersaglio hanno le proteine, negli altri due casi abbiamo visto come bersagli il DNA o l'mRNA. Anche qui si produce un oligonucleotide, in questo caso si va ad avere un riconoscimento che porta ad un blocco della funzione di quella proteina. Sono degli oligonucleotidi.

1. Specificità: gli aptameri sono in grado di legarsi in modo altamente specifico a una determinata proteina o molecola bersaglio.
2. Stabilità: gli aptameri sono stabili e resistenti alle condizioni ambientali, consentendo un utilizzo più versatile rispetto agli anticorpi.
3. Facilità di produzione: gli aptameri possono essere prodotti in modo rapido e conveniente utilizzando tecniche di sintesi chimica.
4. Modificabilità: gli aptameri possono essere facilmente modificati per migliorare la loro affinità o selettività verso la molecola bersaglio.
5. Applicazioni diagnostiche: gli aptameri possono essere utilizzati come sonde per rilevare la presenza di specifiche proteine o molecole in campioni biologici.
6. Applicazioni terapeutiche: gli aptameri possono essere utilizzati come agenti terapeutici per inibire l'attività di specifiche proteine o molecole bersaglio.

• I parametri farmacocinetici sono estremamente variabili e difficili da prevedere nella maggior parte dei casi
• Sono piccoli e quindi possono essere più facilmente eliminabili attraverso la filtrazione renale, quindi si ha vitamedia bassa sia per via dell'attività delle nucleasi che per via della filtrazione
• Se non vengono modificati chimicamente, subiscono immediata degradazione da parte delle nucleasi

PEGilazione.

• Pegaptanib sodium (Macugen, prodotto da Pfizer insieme ad Eyetech)

È un aptamero che presenta 2’metossi purine, 2’ fluoro pirimidine, due 2’ ribo purine; coniugate con un 40kD di PEG in5’ e in 3’ una desossiTimidina invertita. Approvato sia in USA che UE.

Bersaglio: è la VEGF cioè il fattore di crescita vascolare endoteliale, quello che stimola la crescita dei vasi piccoli

Indicazione terapeutica: degenerazione maculare correlata all’età, un disturbo visivo che riguarda pazienti in età adulta, generalmente con età superiore ai 50 anni.

Adesso un po' superato con gli anticorpi monoclonali.

15/10/2019

Il target è il VEGF, ma in realtà ne esistono diversi, si parla di A, B, C, D ed E. alcuni svolgono la stessa funzione altri invece hanno anche altre funzioni. Esistono anche diversi recettori per questi VEGF: VEGFR1, 2, 3.

VEGFR1 sono i recettori coinvolti nella R3 è coinvolto

Nella linfoangiogenesi, cioè la formazione dei vasi linfatici, il recettore VEGFR2 è il più importante, in quanto coinvolto nella vascolarizzazione diretta. Il recettore VEGFR1 sembra invece avere una funzione regolatoria, controllando la quantità di VEGF che si lega a VEGFR2.

Quando si parla di VEGF senza specificare le lettere, ci si riferisce al VEGFA, che presenta varie isoforme. Queste isoforme sono il risultato di uno splicing alternativo, ovvero di un processo in cui vengono rimossi diversi introni da un gene.

Le isoforme di VEGFA sono le seguenti:

• VEGFA-121: sempre secreta
• VEGFA-143 e VEGFA-165: meno comuni
• VEGFA-189 e VEGFA-206: sempre contenute all'interno della matrice extracellulare e per essere liberate necessitano di un processo proteolitico

L'isoforma predominante e con maggiore attività che si ritiene coinvolta nella formazione di nuovi vasi è l'isoforma 165, presente sia in forma libera che legata all'interno della matrice extracellulare.

Altri fattori che possono essere coinvolti nella linfoangiogenesi sono VEGFB e PLGF1,2.