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Potere disinfettante


Scopo: Individuare il potere disinfettante di diverse sostanze.

Materiali/Strumenti:
• 2 Beute da 250 ml con tappo;
• Bilancia tecnica;
• Piastra riscaldante;
• Becco Bunsen;
• 13 Provette con tappo e portaprovette;
• 13 Piastre Petri;
• Campanelle di Dhuram (per verificare la formazione di gas);
• Scotch di carta;
• Cotton Fioc sterili;
• Ansa;
• Vetrini con vetrini copri oggetti;
• Timer;
Microscopio.

Sostanze/reagenti:
• Terreno Nutrient Broth;
• Terreno TSA Agar;
• Acqua distillata;
Alcol;

Candeggina;
• Disinfettante;
• Violetto di Genziana;
• Lugol;
• Safranina.

Procedimento:

Preparazione terreno liquido:

1. Prelevare 1.20 grammi di NT (Nutrient Broth) e inserirli in una beuta da 250 ml;
2. Aggiungere 150 ml di Acqua distillata e agitare;
3. Mettere la beuta in Autoclave.

Preparazione terreno solido

1. Prelevare 11.50 grammi di TSA Agar e inserirli in una Beuta da 250 ml;
2. Aggiungere 250 ml di Acqua distillata;
3. Riscaldare il terreno con la piastra riscaldante portandolo ad ebollizione per almeno tre volte (ebollizione circa 60/70°);
4. Mettere in autoclave.

Semina terreno in piastra e in provetta:

1. Accendere il Becco Bunsen per lavorare in sterilità;
2. Riscaldare il terreno TSA Agar in modo che sia un po’ liquido e quindi possibile da seminare;
3. Prendere 13 piastre e seminare il terrreno TSA Agar, aspettare che si solidifichi;
4. Prendere il terreno Nutrient Broth e inserirne 9 ml in ognuna delle 13 provette;
5. Aggiungere alle provette la Campanella di Dhuram.

Semina

1. Dividere il bancone in 12 spazi con dello scotch di carta;
2. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 60 secondi nell’alcol;
3. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
4. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
5. Flambare il bordo della provetta 1 e immergere all’interno il cotton fioc;
6. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 120 secondi nell’alcol;
7. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
8. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
9. Flambare il bordo della provetta 5 e immergere all’interno il cotton fioc;
10. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 240 secondi nell’alcol;
11. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
12. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
13. Flambare il bordo della provetta 9 e immergere all’interno il cotton fioc;
    Candeggina:
1. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 60 secondi nella candeggina;
2. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
3. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
4. Flambare il bordo della provetta 2 e immergere all’interno il cotton fioc;
5. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 120 secondi nella candeggina;
6. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
7. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
8. Flambare il bordo della provetta 6 e immergere all’interno il cotton fioc;
9. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 240 secondi nella candeggina;
10. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
11. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
12. Flambare il bordo della provetta 10 e immergere all’interno il cotton fioc;

    Disinfettante:
1. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 60 secondi nel disinfettante;
2. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
3. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
4. Flambare il bordo della provetta 3 e immergere all’interno il cotton fioc;
5. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 120 secondi nel disinfettante;
6. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
7. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
8. Flambare il bordo della provetta 7 e immergere all’interno il cotton fioc;
9. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 240 secondi nel disinfettante;
10. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
11. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
12. Flambare il bordo della provetta 11 e immergere all’interno il cotton fioc;

    Acqua:
1. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 60 secondi nell’acqua;
2. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
3. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
4. Flambare il bordo della provetta 4 e immergere all’interno il cotton fioc;
5. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 120 secondi nell’acqua;
6. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
7. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
8. Flambare il bordo della provetta 8 e immergere all’interno il cotton fioc;
9. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 240 secondi nell’acqua;
10. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;
11. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;
12. Flambare il bordo della provetta 12 e immergere all’interno il cotton fioc;

Tenere una piastra e una provetta contenenti terreno come indicatore, quindi senza seminare nulla.

Osservare e descrivere il contenuto delle provette e delle piastre a distanza di una settimana.

Per osservare meglio alcune colonie di batteri presenti in alcune piastre effettuiamo la colorazione di Gram:

1. Sterilizzare un’ansa con il Becco Bunsen;
2. Strisciare l’ansa su una colonna;
3. Mettere una goccia d’acqua distillata su un vetrino;
4. Seminare con l’ansa la parte di colonia prelevata e far asciugare;
5. Aggiungere il Violetto di Genziana e lasciarlo agire per 2 minuti;
6. Rimuovere l’eccesso di colore senza lavare;
7. Aggiungere il Lugol e lasciarlo agire per 2 minuti;
8. Rimuovere l’eccesso di colore, senza lavare;
9. Lavare con alcol per far scendere i residui rimasti di colorante;
10. Sciacquare con acqua distillata il vetrino;
11. Aggiungere La Safranina e lasciarla agire per 30 secondi;
12. Sciacquare con acqua distillata;
13. Coprire con il vetrino copri oggetti;
14. Osservare con il microscopio.


Osservare e commentare i risultati ottenuti.

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