Concetti Chiave
- Le citosine metilate vengono evidenziate per confrontare differenze di metilazione tra cellule staminali e differenziate, mappando variazioni durante lo sviluppo embrionale.
- L'attività specifica delle metil-trasferasi è misurata per determinare la presenza e quantità degli enzimi legati alla metilazione, indipendentemente dalla quantità totale di campione.
- RNA regolatori giocano un ruolo cruciale nella regolazione della metilazione del DNA, influenzando la regolazione genica.
- Il DNA metilato è legato da proteine che possono reclutare HDAC, repressori della trascrizione, influenzando l'espressione genica.
- Le mappe di metilazione del DNA aiutano a comprendere le variazioni di metilazione dalla fase germinale allo sviluppo dell'embrione.
Indice
Tecniche di evidenziazione delle citosine
Le citosine metilate possono essere messe in evidenza mediante una tecnica ad hoc, indipendentemente se sono nuove metilazioni o mantenimento.
Questo permette di confrontare due popolazioni cellulari, ad esempio una staminale e una differenziata per valutare la differenza delle metilazioni in termini quantitativi ma soprattutto la posizione della metilazione.
Mappe di metilazione embrionale
Grazie a queste indagini è stato possibile costruire delle vere e proprie mappe che mostrano come la metilazione varia con lo sviluppo dell’embrione a partire anche dalle cellule germinali.
Per poter definire la presenza e la quantità degli enzimi legati alle metilazioni devo andare ad esprimere il concetto in termini di attività specifica per le metil-trasferasi. Ad esempio se volessi confrontare due campioni contenenti l’enzima partendo da due aliquote differenti, uno 1mg e un altro 50 mg, è chiaro che troverò una maggiore attività enzimatica nel campione più abbondante ed è per questo che per svincolarmi da questo parametro devo valutare l’attività specifica, cioè l’attività dell’enzima che sto valutando rapportata al totale delle proteine presenti nel campione.
Regolazione della metilazione del DNA
E’ stato anche dimostrato che uno degli elementi importanti per la regolazione della metilazione del DNA è determinata dall’intervento di Rna regolatori. In che modo il Dna metilato si rispecchia nella regolazione genica? Il Dna in questione viene legato da proteine che legano il metile e che a loro volta sono in grado di reclutare diversi HDAC (acetilasi) repressori della trascrizione.
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