Laboratorio citogenetica

Reazioni occorrenti

• Terreno di coltura = RPMI + 20% FBS + 3% PHA + 1% P/S in 1^o, 2^o e 3^o giorno

  • RPMI = terreni di coltura
  • FBS = siero bovino fetale
  • PHA = fitogemmaogglutinina
  • P/S = miscela antibiotica da penicillina e streptomicina 50x (10.000 x 1U di P.S e 10.000 ug/ml e streptomicina)

  50 ml di RPMI si conserva a 4°C. Si mescolano seguenti il Siero (FBS) che si conserva a -20°C.

  • da 500 ml terreni: 1 ml di ad ogni giorno
  • 1,5 ml di PHA
  • 12 ml di soluzione
  • 50 ml
  • 38 ml di terreni RPMI
• Soluzione ipotonica
  • KCl 0,075 M _PM = 74,55 g/mol
  • DF
  • MP × Vm × M = 74,55 × 500 × 0,075 / 1000 = 2,8 g di KCl
• Preparazione del cromosoma (colcetrina) in 6 ml di terreni
  • Ci × Vc = Cf × Ve
  • Ci = 100 mg/ml
  • Cf = 0,05 µg/ml
  • VF = 6 ml
  • VC = ?
  • VC = (CR × VE) / CI = 0,05 × 6 / 100 = 0,03 ml = 30 µl
• Fissativo
  • metanolo/acido acetico app. 3:1
  • metanolo = CH₃OH
  • acido acetico = CH₃COOH
  • 20 ml = 15 ml di metanolo e 5,0 ml di acido acetico
  • In 6 ml di terreni
  • 0,8 ml sangue
  • 5,4 ml di terreni RMPI