Tecniche per lo studio microscopico

Tecniche per lo studio microscopico

Introduzione alla microscopia clinica

Nella routine clinica, l’osservazione microscopica ottica di microrganismi abbastanza grandi e del materiale cellulare viene effettuata con un esame microscopico diretto a fresco. Questo metodo si utilizza quando si vogliono apprezzare al microscopio ottico i dettagli interni dei microrganismi.

Esame diretto

Solo gli elminti e gli artropodi possono essere visibili a occhio nudo, mentre batteri, funghi e protozoi richiedono l'uso del microscopio ottico. Le singole particelle virali, invece, sono visibili solo con il microscopio elettronico. Nell’esame diretto, i campioni clinici o sospensioni di microrganismi possono essere fissati su un vetrino ed esaminati direttamente con la microscopia in campo chiaro, in campo oscuro o a contrasto di fase.

La preparazione del campione per l’esame microscopico diretto è relativamente semplice: il campione viene sospeso in acqua o soluzione salina (preparato a fresco: non colorato), mescolato con alcali (per sciogliere il materiale di fondo; metodo all’idrossido di potassio) o mescolato con una soluzione di alcali e colorante di contrasto (es. blu di lattofenolo o tintura di iodio/Lugol). La presenza di coloranti non specifici induce tinteggiatura del materiale cellulare, aumentando il contrasto con lo sfondo e permettendo quindi un esame più dettagliato delle strutture.

Tecniche alternative

Un’alternativa a tale tecnica è il metodo all’inchiostro di china, sostanza in grado di oscurare lo sfondo piuttosto che la cellula. Viene impiegato nell’individuazione di particolari microrganismi forniti di capsula, come il lievito Cryptococcus neoformans nel liquido cerebrospinale: una goccia di liquor centrifugato è miscelata con una goccia di inchiostro di china su un vetrino da microscopio, su cui viene posto un vetrino coprioggetti. I criptococchi sono identificati per le loro grandi capsule trasparenti, dato che il colorante, rimanendo fuori dalla capsula, crea un alone (ben visibile) intorno alla cellula del fungo.