Schema su Dna e tecniche di base

Transfezione: mediata da peptidi; iniezione; mediata da virus;

mediata da liposomi; elettroporazione; metodi chimici Linee cellulari secondarie:

Mediata da liposomi: non si tratta di normali liposomi (vescicole a Metodi di transfezione: tendono ad Linee cellulari primarie: le cellule ottenute da

cellule ottenute da

doppio strato lipidico che racchiudono una sostanza idrofila) ma di aumentare la permeabilità della membrana tessuto non si dividono o lo fanno per poche

tessuto riescono a dare

lipidi che formano vescicole lungo il DNA favorendone l'ingresso al DNA superando l'ostacolo dell'ingresso del volte prima di andare incontro a senescenza

numerose generazioni

attraverso la membrana. I vantaggi sono: facile esecuzione, DNA costituito dalla matrice extracellulare (incapacità di proliferare) e morire

prima di morire

riproducibile, i liposomi evitano la degradazione del DNA entrato Esistono diverse tecniche di trasformazione: Cultura di cellule animali: 1.Si preleva

3.La trasformazione ha una efficienza minore

2.Affinché sia mantenuto nell'ospite e trattamento con una combinazione di cationi bivalenti e frammento di tessuto 2.Digestione con

del 100% quindi è necessario distinguere le

trasmesso alle generazioni successivo shock termico; elettroporazione; Gene gun; proteasi per degradare matrice

cellule trasformate da quelle non trasformate

successive deve essere integrato in infezione con virus i cui genomi sono stati modificati in extracellulare e separare le cellule

-> si utilizzano marcatori di selezione

una unità di replicazione funzionante modo da contenere il DNA esogeno (metodo usato per 3.Trasferimento con terreno e fattori di

-> si tratta del vettore di clonaggio eucarioti e batteri); microiniezione (cellule mammifero) crescita per stimolare la proliferazione

Efficienza di trasformazione: quantità di

1.Il DNA è una molecola che attraversa trasformati/quantità DNA Microiniezione di DNA: DNA

Consiste nel trasferimento Linee cellulari trasformate: in seguito a

difficilmente le membrane -> si iniettato nel nucleo delle cellule

di DNA esogeno all'interno cambiamenti genetici le cellule perdono il

utilizzano metodi di trasformazione in coltura applicabile su cellule

di una cellula ospite

E.coli ospite standard di clonaggi date la controllo sulla divisoione cellulare e crescono

di grossa taglia (bassa

elevata efficienza raggiungibile indefinitamente (linee immortalizzate)

probabilità di integrazione)

Il taglio e la riunione Concetto di trasformazione e

del DNA avviene con Analisi ad alta risoluzione del DNA

metodi di trasformazione

Come introdurre DNA

enzimi di restrizione in cellula ospite Elettroforesi su gel

e DNA ligasi Cons