Microbiologia generale e lab. - nozioni generali

Caratteristiche dei ribosomi batterici

I ribosomi batterici sono 70s, divisi in 30s e 50s.

Episomi

Gli episomi sono plasmidi che, per la traduzione, hanno bisogno di essere integrati nel genoma della cellula batterica, a differenza dei plasmidi veri. Questo avviene attraverso il passaggio di DNA da una cellula donatrice ad una recettrice.

Trasformazione

Nella trasformazione, che è lo stato di competenza, si creano condizioni cellulari favorevoli per il passaggio di genoma. Questo processo viene utilizzato nelle manipolazioni genetiche.

Coniugazione

Nella coniugazione, che avviene per lo più nelle enterobacteriaceae, il pilo sessuale si lega alle proteine OMPA, che ne permettono l'ancoraggio.

Esotossine

Le esotossine (es. tetanospasmina, colerica, botulinica) sono composte da due subunità: A e B. La A è quella "attiva", mentre la B è la "binding". Nella tetanospasmina, la A sarebbe la catena leggera e la B è la catena pesante.

Proteina A dello stafilococco

La proteina A dello stafilococco lega il segmento Fc delle Ig, in questo modo inibisce la clearance batterica anticorpo-mediata.

Morbo

Il morbo di Lyme è caratterizzato da un eritema migrante.

La febbre della malaria arriva talvolta a 40°C, in questo modo vengono uccisi gli schizonti e si ha la sincronia nell'andamento della febbre.

ETEC e EPEC agiscono nel tenue.

EIEC e EHEC agiscono nel crasso. EHEC inoltre si trova in hamburger poco cotti.

Nel soggetto malato di AIDS o immunocompromesso dà meningoencefalite. Il toxoplasma causa endocardite, polmonite atipica, epatite. Ha il trofozoita a forma di arco.

L'HIV in tutto ha 9 geni. Attaccano il fegato e il rene per lo più.

Le leptospire...

Nella tubercolosi si formano le caverne tubercolari. Quando il M. tuberculosis entra e prolifera nei macrofagi attivati, richiama i leucociti e i macrofagi. Il suo rilascio in grandi quantità e la liberazione di IL-12 attivano i CD4+ (meningite e laringite tubercolare).

Il cloramfenicolo serve per la salmonella.

La nistatina serve per la candidiasi.

Per la leishmania servono antimoniali.

Distinzione Farmaci:

• ...

Origine:

• Composizione chimica
• Meccanismo d'azione

Interferenza con la creazione della parete cellulare:

• Modificata permeabilità della membrana
• Interferenza con la sintesi di proteine
• Interferenza con il metabolismo degli acidi nucleici
• Antimetaboliti

Attività antibatterica:

• Battericidi (penicilline)
• Batteriostatici (macrolidi)

Spettro d'azione:

• Molto ampio
• Ampio
• Medio
• Limitato

Emivita: periodo in cui la concentrazione plasmatica di un farmaco si riduce della metà.

Resistenza ad un dato farmaco è la resistenza del microrganismo alla massima concentrazione del farmaco non tossica. (quando l'eradicazione del germe richiede concentrazioni superiori alla MIC)

Resistenza agli antibiotici:

• Modificata permeabilità
• Modificate PBP
• Modificato recettore per antibiotico
• Capsula più densa
• Efflusso attivo
• β-lattamasi
• Metabolismi alternativi

La resistenza può essere di tipo

cromosomiale o di tipo extracromosomiale. Relazioni fra antibiotici di additività, sinergismo, antagonismo. THE BASTARDS Listeriolisina O: fattore di virulenza con effetto citolitico ed emolitico. Bartonella elizabethae endocarditi Bartonelle: la bacilliformis ha un ciuffo di flagelli polari, cresce senza CO2, cresce a 28°C. Le altre no flagelli, serve CO2 al 5% e crescono a 37°C. Método di Burri all'inchiostro di china: si colora il germe (generalmente pneumococco o meningococco) con inchiostro di china: il corpo del germe viene colorato e invece la capsula no. Così si ha una colorazione a contrasto. Reazione di rigonfiamento della capsula di Neufeld: si stempera un'ansata dello stipite (pneumococco o meningococco) in una goccia di antisierospecifico, poi si esegue una colorazione a contrasto con inchiostro di china o blu di metilene. Se l'antisiero specifico usato è quello apposito verso lo stipite si avrà un rigonfiamento di

circa 4 volte della capsula. Serve per la sierotipizzazione del germe in questione.

Reazione di arrossamento di Dick: se in una persona che non ha mai avuto la scarlattina inietto la tossina eritrogenica A avrò, nel sito di inoculazione, una reazione di arrossamento. Serve per vedere il grado di immunizzazione verso lo streptococco A.

Reazione di schiarimento di Charlton-Shultz: se in una persona scarlattinosa inietto antisiero contro la tossina eritrogenica A avrò lo schiarimento della zona in cui è avvenuta l'inoculazione.

Reazione di termoprecipitazione di Ascoli: ricerca un antigene specifico del bacillus anthracis, termostabile. Prendo la biopsia, ne faccio un omogeneizzato, lo metto in acqua calda. Dopodiché tutti gli Ag termolabili saranno stati rimossi: a questo punto uso antisiero anti-carbonchio e osservo una reazione di precipitazione.

Test della tubercolina: inietto PPD (purified protein derivated) intradermica: se il soggetto è già

Entrato i contatto almeno una volta con il Mycobacterium tuberculosis, entro 48-72 h avrò una reazione di indurimento e arrossamento.

Reazione di Widal: ricerca di Ab agglutinanti per la diagnosi di salmonellosi. Si usa siero del paziente per osservare l'agglutinazione, rivolta agli Ag O e H della salmonella. Calcola anche il titolo, quindi usa diluizioni scalari di siero.

Reazione di Wright: ricerca di Ab agglutinanti sospetto di Brucellosi: reazione di agglutinazione che usa siero del paziente e brucella abortus inattivata a 65°C.

N.B. la reazione di Wright e quella di Widal sono usate per differenziare la brucellosi (febbre ondulante) dalla salmonellosi (febbre a sega).

Reazione di Weil-Felix: ricerca di Ab agglutinanti per il sospetto di Rickettsiosi: uso il siero del paziente e ceppi particolari di proteus vulgaris: OX19, OX2, OXK, che hanno antigeni in comune con le Rickettsie. Se avviene l'agglutinazione allora il

Soggetto è stato colpito da questo germe.

Reazione di Wassermann: la reazione serve per diagnosticare la sifilide, quindi la presenza di antisiero anti-treponema. Wassermann usava fegato di feto eredoluetico, poi si è scoperto che si poteva sostituire con un estratto alcol-etereo di cuore di bue o cavia (che si comportava come l'antigene specifico). La miscela (siero in esame + cardiolipina + complemento) viene posta a 37° per un'ora. Si aggiunge il sistema emolitico (globuli rossi di montone o cavallo) privato del suo complemento. Si lascia reagire: se è avvenuta la reazione antigene-anticorpo allora il complemento sarà fissato, quindi non avverrà la reazione emolitica. Se non è avvenuta la reazione Ag-Ab il complemento sarà libero di provocare emolisi.

Reazione di flocculazione: se al siero di un sifilitico aggiungo un sistema composto da cardiolipina + colesterolo (o lecitina): questi ultimi due aumentano la sensibilità del test.

In presenza di elettroliti avverrà la formazione dei cosiddetti flocculi, precipitati lattescenti ed amorfi. Esempio VDRL.

Reazione di immobilizzazione di Nelson-Mayer: reazione Ab-Ag contro un Ag specifico: se avviene questa reazione si osserva la neutralizzazione del movimento. Questo perché l'Ag bersaglio è un Ag flagellare, che quindi media il movimento. Si usa associata ad un esame a fresco in campo oscuro. Si esegue per germi come T. pallidum e V. cholerae (germi dotati di una grande capacità di movimento).

Reazione di Martin-Petit: calcola il titolo del siero (quindi diluito scalarmente) capace di agglutinare i diversi sierotipi di Leptospire.

Intradermoreazione per la diagnosi di Francisella Tularensis: si esegue mediante l'inoculazione di lisati batterici. La reazione è positiva se il soggetto ha contratto il germe da almeno 10 giorni.

Dye-test di Sabin-Feldmann: riguarda il toxoplasma: test di neutralizzazione dell'assunzione di

sostanza chiamata Limulus amebocyte lysate (LAL) che reagisce con l'endotossina. La colorazione vitale con blu dimetilene viene utilizzata dopo la reazione Ag-Ab. Questo test viene eseguito utilizzando parassiti vivi e virulenti. La retta di regressione tra la concentrazione minima inibitoria (MIC) e l'alone di trasparenza dell'antibiogramma mostra una proporzionalità inversa: all'aumentare della MIC, l'alone sarà minore. Un batterio resistente è un batterio che riesce a sopravvivere alla massima concentrazione non tossica di un antibiotico per l'uomo. Nel caso della brucellosi cronica, si formano anticorpi incompleti e quindi si ricorre al test di Coombs. Questo test utilizza anticorpi anti-Ig umane con due siti di legame e quindi si forma l'agglutinato ugualmente. I fattori antifagocitari includono la presenza di una capsula, la produzione di coagulasi, leucocidine e il sequestro di ferro. I fattori di invasività includono la produzione di emolisine, ialuronidasi, lipasi, proteasi, ecc. Gli effetti del lipopolisaccaride (LPS) includono la capacità di agire come pirogeno, ipotensivo, attivare il complemento e causare leucopenia e linfocitosi. Il test del Limulus viene utilizzato per verificare la presenza di endotossine in liquidi iniettabili. Questo test si basa sulla capacità dell'endotossina di agglutinare una sostanza chiamata Limulus amebocyte lysate (LAL).

proteina del Limulus Poyphemus. Antibiogramma testa sensibilità, sensibilità intermedia e resistenza. Fase di arricchimento: per M. Tuberculosis: metto il preparato con NaOH e un indicatore di pH a 37° per un’ora. Poi neutralizzo con HCl e centrifugo: il sedimento lo coltivo. (elimina gli altri batteri es. MOTT). Non fermentante, ossidasi + (distinzione dalle enterobacteriaceae) e piocianina: Pseudomonas: stimola la produzione di radicali liberi. Terreno per brucella: agar-sangue, bifasico, con microaerofilia. H. pylori: non invasivo. Produce fattori chemiotattici per la risposta immune. Bordetella: capsulata, con granuli metacromatici ai poli. Neutrofili nelle feci, il jejuni cresce con 42° ed è sensibile all’acido nalidixico; il Campilobatteri: fetus non cresce a 42° ed è insensibile all’acido nalidixico. Listeria: polimero di actina, se tratto a 4° la biopsia avrò la lisi cellulare e liberazione di listeria, quindi coltura.

facilitata su agar-sangue con glucosio.

Cryptococcus: sferico, privo di micelio e capsulato (metodo di Burri).forme a punta, radicali liberi, colonie a uovo fritto.

Micoplasmi:

Sistemi adottati dai batteri per l'antibiotico-resistenza:

• Modificazione delle porine,
• Capsula impermeabile
• Modificazione delle PBP
• Efflusso attivo: proteine che trasportano all'esterno l'antibiotico
• β-lattamasi
• Attivazione di vie metaboliche alternative (es. folati per i sulfamidici)
• Modificazione del recettore cellulare per l'antibiotico

Diagnosi di Leishmania: puntura splenica, aspirato midollare, terreni NNN, microscopia.

sistema coagulasi/fibrinolisina; antigeni W e V per la vita nel macrofago, diagnosi con

Yersinia:termoprecipitazione di Piras.capsula polipeptidica e metacr