Basi di morfologia umana - esercitazione microscopi

Microscopio ottico e preparazione dei campioni

Tipi di microscopi

I microscopi sono strumenti fondamentali per osservare campioni microscopici. Tra i principali tipi di microscopi troviamo:

• Ottico
• A fluorescenza
• Fluorescenza confocale (più piani)
• Elettronico a scansione
• Elettronico a trasmissione

Potere risolutivo del microscopio ottico

Il potere risolutivo di un microscopio ottico è la capacità di distinguere due punti come separati. Le immagini ottenute sono generalmente >1 micron. I vetrini osservati al microscopio sono sempre miscugli di tessuti.

Creazione del preparato

Fissazione

La fissazione è fondamentale per impedire la degradazione del campione. Esistono due tecniche principali:

• A freddo: Si abbassa la temperatura per inattivare enzimi degradanti. Viene utilizzata quando è necessaria una diagnosi velocissima per operazioni imminenti. Tuttavia, è meno definita rispetto ad altre tecniche ma richiede meno tempo.
• Chimica: Si utilizzano aldeidi che rallentano gli enzimi, ottenendo preparati più definiti. Questa tecnica richiede molto più tempo e non può essere utilizzata in emergenza.

Tagliare

Il taglio del campione è possibile solo se l'organo è solido. Con la tecnica a freddo, il campione è solido grazie alla bassa temperatura, consentendo una diagnosi veloce. Nel caso di fissazione chimica, il campione deve essere incluso in paraffina. Poiché la paraffina è lipidica, è necessario disidratare il preparato facendolo passare in soluzione alcolica. La fettina finale è di pochi micron e viene affettata da un microtomo.

Colorare

La colorazione è un passo essenziale e cambia a seconda del tipo di colorante utilizzato. La colorazione più comune è ematossilina-eosina:

• Ematossilina blu colora acidi come i nuclei (DNA), e RNA in zone ad attiva sintesi proteica.
• Eosina rossa colora basi come citoplasma, collagene, ecc.

Attenzione: a causa del processo, spesso i lipidi possono andare persi, il che significa che ciò che è lipidico può risultare vuoto. Se si devono evidenziare altre strutture, si usano coloranti specifici.