Appunti Patologia viticola

3.5 ISOLAMENTO E IDENTIFICAZIONE MORFOLOGICA

Si usava in passato per riconoscere organismi patogeni delle piante, isolandoli e facendoli crescere su substrati di laboratorio poi si isolano le colonie e si identificano su base morfologica con chiavi di identificazione. Oggi si usano anche metodi molecolari.

3.5.1 CORPI FRUTTIFERI SESSUATI

• Ascocarpo: un corpo fruttifero sessuale di fungo ascomicete che produce aschi e ascospore.
• Apotecio: un corpo fruttifero fungino aperto, simile a una tazza o simile a un disco, ascocarpo, spesso supportato su un gambo (funghi come li vediamo noi). A volte anche la botrite può avere questi corpi fruttiferi ma è estremamente raro.
• Ascostroma: un corpo fruttifero contenente aschi bitunicati (a doppia parete) in loculi (cavità); di solito scuso con più loculi, ma a volte singolo. Non è un vero corpo fruttifero ma più un tessuto concavità che contengono aschi e ascospore.
• Peritecio: corpo

1. Fruttifero a forma di pallone o subgloboso a parete sottile contenente aschi e ascospore unitunicati; le spore vengono espulse o rilasciate attraverso un poro (ostiolo) all'apice.
2. Pseudotecio, corpo fruttifero simile al peritecio che contiene aschi bitunicati in luoghi o cavità non allevati.
3. Ciasmotecio, non ha un'apertura naturale alla maturità, ma si apre con la rottura, precedentemente noto come cleistothecium.
4. Basidiocarpo, corpo fruttifero sessuale di un fungo basidiomicete (anche basidioma).
5. Basidiospora, spora sessuale di solito aploide (1N) prodotta da un basidio.

3.5.2 CORPI FRUTTIFERI ASESSUATI

1. Acervulo, corpo fruttifero eroso (aperto), simile a un cuscino che porta conidi e talvolta setole.
2. Picnidio, corpo fruttifero piriforme con ostiolo in cima da cui escono i conidi. I picnidi sono una massa arricciata simile a un viticcio di spore (conidi) trasudate, tenuta insieme da una matrice mucillaginosa.
3. Conidioforo, ifa semplice o

ramificata su cui vengono prodotti i conidi

3.5.3 FASE SESSUATA

• Anteridio, struttura sessuale maschile (gametangiomaschile) trovato in alcuni funghi e organismifungiformi.
• Oogonio, una struttura sessuale femminile con al suointerno le oospore.

3.5.4 SPORE DI RESISTENZA

Chlamydospora, una spora asessuata a parete spessa o a doppia parete formata da cellule ifali (terminali ointercalari) o dalla trasformazione di cellule conidali che può funzionare come struttura svernante.

3.5.5 DEUTEROMICETI

Un termine arcaico per un gruppo di funghi senza stadio sessuale. Indicava lo stadio asessuale dei membridi Ascomiceti e Basidiomiceti (anche Fungi Imperfecti, funghi imperfetti).

Stadio imperfetto: forma asessuata nel ciclo vitale di un fungo, quando vengono prodotte spore asessuate(come conidi) o senza spore (vedi anche anamorfo) (contrario stato perfetto, teleomorfo).

3.6 TEST SIEROLOGICI

Nati principalmente perché i virus non possono essere coltivati ad hoc. Disponibili per

più di mille virus e altri agenti patogeni, batteri e funghi

Basati su reazione antigene-anticorpo usando policlonali e antisieri monoclonali e tecniche quali:

• Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
• Western blot
• Saggi immunostrip
• Saggi dot-blot immune-binding

Microscopia elettronica sierologicamente-specifica (SSEM) 3.6.1 ANTIGENE – ANTICORPO

Gli anticorpi: (immunoglobuline) molecole a forma di Y, proteine prodotte dall'organismo animale che aiutano a combattere le sostanze estranee chiamate antigeni

Gli antigeni: tutte sostanze che stimolano il sistema immunitario a produrre anticorpi. Gli antigeni possono essere batteri, virus o funghi che causano infezioni e malattie.

Determinante antigenico: un sito sulla superficie di una molecola antigenica a cui si lega una singola molecola di anticorpo. Generalmente un antigene ha diversi o molti differenti determinanti antigenici e reagisce con molti anticorpi diversi. Chiamato anche

EPITOPO3.6.2 TEST ELISA

Identificazione di una proteina o più separandole sul gel di poliacrilamide, trasferendole su membrana(nitrocellulosa) e poi riconoscimento con anticorpo specifico. Si può anche fare direttamente su gel.

3.6.3 WESTERN BLOT

Il materiale delle foglie estratto scorre automaticamente verso l'immunostrip. Il formato è simile ai kit per test di gravidanza casalinghi. Una linea rossa indica un test negativo e due linee indicano un test positivo per il patogeno. I risultati positivi possono essere visibili entro 5 minuti, ma possono impiegare fino a 30 minuti.

3.6.4 IMMUNOSTRIP

La proteina/peptide viene applicata sulla membrana. Dopo l'incubazione con l'anticorpo primario, viene creato il complesso Ag-Ab. La stabilità di tale complesso immunitario è testata usando il reagente. Gli immuno-complessi vengono rilevati dallo sviluppo del colore usando un anticorpo secondario con HRP (perossidasi) in presenza di

perossido di idrogeno e cromogeno.

3.6.6 MICROSCOPIA SIEROLOGICAMENTE SPECIFICA

Microscopia elettronica a scansione o trasmissione con particelle immunogold. Si evidenzia la posizione dell'antigene nella/sulla cellula.

3.7 METODI MOLECOLARI

3.7.1 Diverse tipologie:

PCR con primers specifici e sequenziamento di tratti informativi, es DNA tratto ITS (internaL transcribed spacer) è il DNA distanziatore situato tra i geni del RNA ribosomiale della subunità piccola (rRNA) e geni del rRNA della subunità grande nel cromosoma. Marcatori molecolari come microsatelliti, SNPs, ecc.

3.7.2 REGIONE ITS ED ECOLOGIA MOLECOLE DEI FUNGHI

• La regione del DNA più ampiamente sequenziata e sequenza di universale di bar coding fungigna
• Sistematica molecolare a livello di specie e di genere, e persino all'interno di specie (ad es. per identificare razze geografiche)
• Oltre ai primer universali ITS1 + ITS4 utilizzati da molti laboratori, anche altri primer