Microbiologia - esercizi

Esercizio 1 microbiologia

(È già svolto!!! La parte da compilare è quella relativa ai colori "giallo" e "bianco" affianco a +/- IPTG):

Un ceppo di E. coli con mutazione lac I- viene trasformato di volta in volta con la serie di plasmidi il cui genotipo è riportato in seguito. I trasformanti con e senza induzione con IPTG sono sottoposti a saggio di Beta-galattosidasi. Riportare la reazione colorimetrica attesa.

• a) plac O lacZ ==========> +IPTG = giallo; -IPTG = giallo
• b) plac O^c lacZ =========> +IPTG = giallo; -IPTG = giallo
• c) lac I^s plac O lacZ =======> +IPTG = bianco; -IPTG = bianco
• d) lacI plac O lacz =========> +IPTG = giallo; -IPTG = bianco

Perché

L'IPTG è un induttore come il lattosio, solo che non viene mai metabolizzato. Il saggio della beta-galattosidasi che abbiamo fatto anche a lab serve a capire se l'operone lac è mutato o meno. Se l'operone lac è wild type allora avremo una colorazione gialla perché avviene la reazione della b galattosidasi, se invece la soluzione resta bianca (trasparente) allora l'operone lac non funziona perché mutato.

Per quanto riguarda le mutazioni abbiamo: O^c: costitutiva e cis dominante, l'operatore perde l'affinità per il repressore, ergo la trascrizione è sempre attiva; I^- è costitutiva e trans dominante, il repressore non riesce a legare l'operatore, ergo la trascrizione è sempre attiva; poi c'è la I^s o del super repressore dove il repressore non può legare l'induttore, ergo la trascrizione sarà sempre bloccata.

Quindi nella A, essendo sempre un I-, sarà sempre attiva, con o senza IPTG; nella B da I- viene trasformato in O^c e questo non cambia molto le cose dal punto di vista colorimetrico; la C invece abbiamo il super repressore, ergo tutto bianco perché la trascrizione è bloccata; in D la trasformazione genera una retromutazione quindi avremo un wild type che in presenza di IPTG avverrà la trascrizione e quindi la soluzione sarà gialla, in assenza di IPTG non c'è induttore ergo nessuna trascrizione.

Esercizio 2 microbiologia

Una coltura di E. coli è stata incubata con agitazione a 37°C per 1 ora. Sapendo che il titolo iniziale era di 6x10⁷ batteri/ml e che il tempo di generazione è di 30 min, descrivi le diluizioni che faresti per titolare la coltura.

Risultato: Titolo della coltura a T1h: 2,4 x 10⁸/ml.

Se il tempo di generazione è di 30 minuti, il numero di batteri raddoppierà ogni 30 minuti, per cui in un'ora sarà 4 volte il titolo iniziale, ovvero 6 x 4 x 10⁷ = 24 x 10⁷ = 2,4 x 10⁸ batteri/ml.

Esercizio 3 microbiologia

(Anche questo svolto!): Hai una coltur