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Estratto del documento

Clonaggio funzionale

Saggio di complementazione (test funzionale)
Complementazione di un fenotipo cellulare patologico con frammenti di DNA o di cromosomi umani normale
Esempio: Anemia di Fanconi (1992), AR-1/350000

Saggio di complementazione
FA-A FA-A FA-B
Fusione Fusione
FA wtfenotipo fenotipo

Clonaggio funzionale
Libreria di Trasfezione
cDNA Selezione con Mitomicina C
Cellule FA-C Isolamento del cDNA che complementa Gene FAC, 9q22.3

Clonaggio per posizione
Localizzazione iniziale
Analisi di linkage
Perdita di eterozigosità
Anomalie cromosomiche

Clonaggio per posizione
Analisi di linkage: definizione della regione critica
Saturazione della regione con nuovi marcatori
Identificazione dei ricombinanti (cross-over)
Linkage disequilibrium

cMD10S548 1.415
D10S5951413 5.612
11.2 D10S572 0.1
D10S197 2.2
D10S1775 0.2
D10S593 0.2
D10S1639 2.8
D10S1732 0.9
D10S213 3.3
D10S208 Trombocitopenia

D22S277D22S1142D22S683D22S283D22S1177D22S445D22S272

Clonaggio per posizione
Identificazione dei geni nella regione critica
Mappe di

posizione: Progetto Genoma Clonaggio per posizione: Progetto Genoma Clonaggio per posizione: Progetto Genoma Clonaggio per posizione: Anomalie cromosomiche Traslocazioni e inversioni Duplicazioni e delezioni Clonaggio per posizione: Anomalie cromosomiche Traslocazioni e inversioni Clonaggio del punto di rottura Fluorescent In Situ Hybridization Clonaggio per posizione: Anomalie cromosomiche Duplicazioni e delezioni Microdelezioni evidenziabili molecolarmente 133 133 133 135 202 204 202 194 154 156 160 150 252 244 244 250 185 195 183 179 170 170 170 170 217 229 217 219 164 164 Crom 15 164 164 224 234 228 234 120 114 127 120 167 153 169 157 133 133 135 133 D15S210 202 194 202 D15S128 160 150 154 D15S122 244 250 252 D15S11 183 179 185 GABR3 170 170 170 D15S97 217 219 217 D15S156 164 164 164 164 D15S219 228 234 228 224 D15S165 127 114 127 120 D15S98 169 153 169 167 D15S87

posizioneEsempi:

Mediante linkage e traslocazioni X-autosoma:

Distrofia di Duchenne (DMD)

Mediante linkage e traslocazioni bilanciate:

Neurofibromatosi (NF1)

Mediante mappatura e linkage disequilibrium:

Fibrosi cistica (FC)

Dettagli
Publisher
cecilialll
A.A. 2012-2013
28 pagine
SSD Scienze biologiche BIO/18 Genetica
I contenuti di questa pagina costituiscono rielaborazioni personali del Publisher cecilialll di informazioni apprese con la frequenza delle lezioni di Biologia generale e genetica e studio autonomo di eventuali libri di riferimento in preparazione dell'esame finale o della tesi. Non devono intendersi come materiale ufficiale dell'università Università degli studi di Torino o del prof Piazza Alberto.