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ELISAL'ELISA
ELISAL'ELISA, sta per saggio immuno-assorbente legato ad un enzima. Vi sono diversi tipi di ELISA. Il più usato è l'ELISA indiretto, in cui si prende un ormone e lo si pone in un pozzetto. L'ormone si lega ad un anticorpo. Questo si lega ad un altro anticorpo che è legato ad un enzima. A questo punto viene aggiunto un substrato incolore che si colora in presenza dell'enzima. Quanto più intensa è la colorazione del substrato, tanto maggiore sarà la concentrazione di ormone. Vi sono poi delle varianti, come il sistema diretto o quello a sandwich.
Asse Ipotalamo-Ipofisi
L'ipofisi è molto piccola, ed è ospitata nella sella turcica dello sfenoide, per essere protetta. Può essere suddivisa in due porzioni, una ipofisi anteriore, o adenoipofisi, e ipofisi posteriore, o neuroipofisi. Nel peduncolo il tipo di collegamento è diverso. L'ipofisi è vascolarizzata da due arterie, una.
83! 18/04/2013
inferiore ed una superiore. L'arteria superiore si dirama e forma un sistema portale ipotalamo-ipofisario, perché porta degli ormoni prodotti nell'ipotalamo a contatto con le cellule endocrine dell'adenoipofisi, che in risposta produce altri ormoni.
Per quanto riguarda la neuroipofisi, questa comunica con i nuclei sopraottico e paraventricolari, che producono ormoni che non vengono riversati nel circolo sanguigno ipotalamico, ma vengono secreti a livello del circolo venoso della neuroipofisi (non vengono riversati nel sistema portale). Questi neuroni vengono detti magnocellulari, mentre quelli che riversano gli ormoni nel sistema portale sono neuroni parvocellulari.
L'ipofisi poi produce degli ormoni che controllano il metabolismo di vari organi. Le cellule endocrine dell'ipofisi sono diverse:
- Tireotrope.
- Corticotrope (controllano la corticale surrenale).
- Somatotrope (ormone della crescita).
- Lactotrope.
- Gonadotrope.
- Somatomammotrope.
Gli ormoni prodotti
dell'ipotalamo stimolano attivamente l'ipofisi. Questo asse ha la funzione di collegare stimoli dall'ambiente esterno con il sistema endocrino. Gli ormoni vengono secreti a concentrazioni talmente basse che non possono essere misurate (ci si trova nell'ordine di 10 alla -12/-15 nel sistema portale, quindi sono ancora più basse nel circolo sistemico). <84!Cellule somatotrope> Costituiscono circa la metà delle cellule dell'adenoipofisi e producono l'ormone somatotropo, chiamato anche somatotropina o ormone della crescita (GH). Viene prodotto da 5 geni, che producono 5 isoforme in forma di pre-pro-ormone inattivo. Tutti gli ormoni dell'adenoipofisi sono delle proteine, e GH e la prolattina sono molto simili, infatti si pensa che abbiano un'origine comune. Un altro ormone che ha un'origine comune a questi è la somatotropina corionica, che viene prodotta dalla placenta e le cui funzioni non sono ben chiare.- La somatostatina, chiamata anche SRIF (somatotropin-release inhibiting factor), dove inibisce il rilascio di GH.
- GHRH, growt hormon releasing hormon, cioè ormone che induce il rilascio di GH. Questi due ormoni interagiscono con proteine G, il recettore per la somatostatina è associato ad una proteina Gi, mentre quello GHRH ad una proteina Gs, quindi il fattore decisivo è il livello di cAMP ed il livello di PKA. Inoltre nel rilascio di granuli secretori è sempre coinvolto il rilascio di Calcio.
- La Ghrelina, che induce il rilascio di GH. Il suo recettore, quando è attivato, aumenta il livello di IP3 ed il livello di Calcio, che stimola il rilascio di vescicole contenenti ormone.
è stato dato questo nome.85!Per questa somiglianza si ha la cross-reattività, cioè IGF-1 si può legare ai recettori per l'insulina e viceversa, ma è un fenomeno che avviene poco. Nella crescita del feto non ha un ruolo IGF, ma l'insulina. Quindi è chiaro lo stretto rapporto tra questi due. Però dopo la nascita assume importanza IGF-1.
Inoltre le vie di trasduzione del segnale attivate da questi recettori sono molto simili. [Esiste anche IGF-2 che però non sembra sia influenzato da GH.]
L'IGF-1 in circolo è prodotto soprattutto dal fegato, in quanto nei tessuti extraepatici GH induce una segnalazione paracrina, per cui IGF-1 va a stimolare le cellule vicine. Nel sangue IGF-1 non circola da solo, ma legato a delle proteine di legame, le IGFBP (IGF-1 binding protein).
IGF-1 è responsabile di una inibizione a feedback negativo, in quanto un suo aumento eccessivo va ad inibire la secrezione di GH nell'ipofisi.
Allo stessomodo un aumento di GH e di IGF va ad inibire la secrezione di GHRH e ghrelinae a stimolare la secrezione di somatostatina. Per misurare l'attività del GH, non misurabile nel circolo sanguigno, si misura il livello di IGF-1. Sono state individuate 6 IGFBP, la più importante è la IGFBP3. La loro funzione è importante e serve ad allungare l'emivita dell'ormone, in modo tale che IGF possa raggiungere più facilmente le cellule bersaglio. Inoltre, affinché la segnalazione possa avvenire, è necessario che sia presente un terzo fattore: ALS (subunità acido labile), la cui funzione non è ancora stata ben chiarita. Le IGFBP1 e 2 vengono usate soprattutto per legare IGF a livello locale, nella segnalazione paracrina. Nel corso della giornata il livello di GH varia ed è determinato da un meccanismo circadiano, in quanto si hanno dei massimi all'inizio ed alla fine della giornata. Anche nel corso della vita lasua produzione varia. Subito dopo la nascita si ha un picco, che poi si stabilizza fino alla pubertà, dove raggiunge un massimo e si ha lo scatto puberale. Successivamente il livello di GH cala rapidamente e progressivamente fino a raggiungere il minimo nella vecchiaia. Un aumento di GH è causato da vari altri fattori: 1. Situazioni di stress, traumi, interventi chirurgici, esposizione al freddo. 2. Durante il sonno. 3. Esercizio fisico. 4. Ipoglicemia (infatti per determinare la produzione di GH, si può somministrare insulina, che causa un'ipoglicemia). 5. Aumento di alcuni amminoacidi (arginina e leucina). Infatti nei test per misurare la funzionalità di GH si somministra arginina. 6. Gli ormoni tiroidei. Infatti in condizioni di ipotiroidismo si hanno situazioni di nanismo. 7. Estrogeni e testosterone (motivo dello scatto puberale), ma quanto più tardi aumenta il loro livello, tanto maggiori saranno le dimensioni dell'individuo, in quanto stimolano.anche la saldatura delle metafisi. Invece il livello di GH cala in condizioni di:- Iperglicemia
- NEFA
Il tessuto adiposo. Nel fegato stimola la gluconeogenesi, nel tessuto adiposo stimola la lipolisi e nel muscolo, paradossalmente, si ha l'incorporazione di aminoacidi e di sintesi proteica, aumentando quindi la propria massa. L'iperglicemia e l'aumento di NEFa vanno a retroinibire il GH. Questo determina un aumento del ciclo di Randle. È stato visto che i NEFA inibiscono anche PI3K, che stimola l'incorporazione di GLUT4 sulla membrana. Si determina quindi una situazione di insulinoresistenza che porta al diabete.
19/04/2013 Una carenza di GH causa nanismo, mentre una sua ipersecrezione causa gigantismo. Situazioni ancora più frequenti sono ipersecrezioni di GH in età adulta, sviluppando l'acromegalia, in cui tutti i tessuti risentono dello stimolo proliferativo indotto da GH. Questi soggetti evolvono spesso in una situazione di intolleranza al glucosio prima, e di diabete mellito poi. Nei casi di carenza di GH il problema è sostituire l'ormone.
Finché non si sono sviluppate tecnologie mediante la biologia molecolare, si estraeva dai cadaveri. Il problema è che insieme al GH si estraevano anche dei prioni, responsabili della malattia di Creutzefeldt-Jakob (encefalopatia spongiforme), caratterizzata dalla formazione di cisti nel tessuto cerebrale. Il prione normale ha varie strutture ad alfa elica, un prione evoluto ha anche alcune strutture a foglietto beta. Ora è invece possibile ottenere GH mediante il DNA ricombinante. Nel 50% dei casi GH non può essere nemmeno dosato, infatti si misura indirettamente misurando l'IGF-1 o la IGFBP, oppure somministrando insulina o arginina che stimolano la secrezione di GH. Tiroide - Ormoni tiroidei È possibile anche vivere senza ormoni tiroidei.
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