Lattobacilli e clostridi butirrici

Ricerca dei lattobacilli

Si può fare sia nel latte che nel siero.
1. Semina in piastra
-Si prepara il substrato di MRS agar (parzialmente selettivo) in beuta, poi si mette in autoclave come già precedentemente descritto.
-Semina delle diluizioni, si utilizzano diluizioni 10-5/10-7 per il latte da Parmigiano Reggiano, 10-6/10-9 per il siero, 10-2/10-3 per il latte alimentare. In piastra si mette 1 ml di diluizione, poi il substrato. Si fa raffreddare, poi si mettono le piastre capovolte in termostato.
-Incubazione a 37°C per 72 ore.
-Conteggio, con i metodi già precedentemente descritti.
2.

Semina in doppio strato.
-Si mettono in piastra 15-20 ml di substrato e si lascia solidificare.
-Si mette 1 ml di diluizione e altri 15-20 ml di diluizione, si mescola il tutto.
-Incubazione in termostato a 37°C per 48-72 ore.
Con questa tecnica oltre ai lattobacilli si isolano anche i batteri propionici. Le colonie a occhio nudo non si distinguono, quindi bisogna versare acqua ossigenata nella piastra, e le colonie di batteri propionici creano effervescenza.

È una ricerca qualitativa, ma va bene in quanto nel Parmigiano Reggiano non devono essere presenti.
-In una beuta si prepara una soluzione nutritiva, con acqua distillata, lattato di sodio, acetato di sodio ed estratto di lievito.
-Si preparano le provette per l’analisi, in cui si inserisce 1 ml di soluzione nutritiva, 1 cubetto di paraffina e si tappa il tutto con del cotone da laboratorio.
-Le provette si mettono in autoclave per 15 minuti a 121°C. Una volta estratte il substrato è sul fondo, di colore giallo, mentre la paraffina è sciolta, ed è trasparente al di sopra del substrato. Raffreddandosi la paraffina diventa bianca e solidifica.
-Si seminano direttamente 10 ml di latte non diluito nella provetta, e si mettono le provette a 80-82°C per 10-12 minuti. A questa temperatura vengono uccise tutte le forme vegetative e sopravvivono solo le spore. La paraffine si scoglie nuovamente e il latte si mescola al terreno di coltura.
-Una volta estratte le provette la paraffina solidifica di nuovo. Si mettono le provette ad incubare in termostato per 48 ore, e si segna il limite inferiore. Se il latte non aveva clostridi il tappo di paraffina rimane fermo, mentre se erano presenti questi producono gas determina il sollevamento dei tappi di paraffina.