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SINTESI INSULINA IN CELLULA PANCREATICA

CATENA A 30 aa Unite da ponti S-S

CATENA B 21 aa ESONE 2

ESONE 1 PREPROINSULINA PEPTIDE SEGNALE

PROINSULINA FORMA S-S

IN APPARATO DEL GOLGI

UN ENZIMA RIMUOVE 33aa

A INSULINA

B

C

PRODUZIONE DI INSULINA UMANA IN E. coli

-70 MAIALI PER 1 PAZIENTE PER UN ANNO

-SI PUO’ PRODURRE INSULINA UMANA NEI BATTERI?

-E. Coli NON SA MODIFICARE premRNA EUCARIOTICI

E PRODURRE MODIFICHE POST-TRADUZIONALI

PRODUZIONE DI INSULINA

RICOMBINANTE IN BATTERI

-Plasimidi separati codificano per

Catena A e B

-promotore trp e alcuni codoni iniziali trp

-seq per il trp sono eliminate con

trattamento con bromuro di cianato

-catene mescolate assieme e tramite un

processo chimico si formano legami S-S

PRODUZIONE ORMONE DELLA

CRESCITA UMANO IN E. Coli

-Peptide di 191 aa

-Carenza provoca nanismo ipofisario

-GH da animali non è efficace sull’uomo

-80 ipofisi di cadaveri umani per un paziente per un anno (alto

rischio infezioni - CJ)

PRODUZIONE DI GH

RICOMIBINATE IN BATTERI

MANIPOLAZIONE DELL’ESPRESSIONE GENICA IN

CELLULE EUCARIOTICHE

Vantaggi rispetto a sistemi procariotici

-FOMAZIONE CORRETTA DI PONTI DISOLFURO

-FOLDING CORRETTO

-TAGLIO PROTEOLITICO DA PRECURSORE

-GLICOSILAZIONE

-MODIFICAZIONE DI aa (FORSFORILAZIONE,

ACETILAZIONE, MIRISTILAZIONE, ecc.)

PLASMIDI DI ESPRESSIONE IN EUCARIOTI

Sistemi di trasferimento genico (trasduzione)

• Trasformazione (microoorganismi)

• Trasfezione (eucarioti)

• Infezione (se il vettore è un virus)

Tecniche

• Uso di sostanze permeabilizzanti

• Elettroporazione

• Sistemi liposomici

• Bombardamento con microparticelle

• Microiniezione

Sostanze permeabilizzanti

Trasformazione batterica

• Calcio cloruro

• Metalli pesanti

Trasformazione lieviti

Acetato di litio

Trasfezione cellule animali

Calcio fosfato

• DEAE-destrano/ clorochina

Elettroporazione


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DESCRIZIONE APPUNTO

Appunti di Biologia molecolare del professor Di Cunto sulla manipolazione genetica. Nello specifico gli argomenti analizzati sono i seguenti: la produzione di proteine e il loro impiego, la manipolazione dell'espressione genica (nei procarioti e nelle cellule eucariotiche) e le sue conseguenze, le proteine di fusione, le modificazioni post-traduzionali, il problema del folding e la trasduzione.


DETTAGLI
Corso di laurea: medicina e chirurgia
SSD:
Università: Torino - Unito
A.A.: 2013-2014

I contenuti di questa pagina costituiscono rielaborazioni personali del Publisher cecilialll di informazioni apprese con la frequenza delle lezioni di Biologia molecolare e studio autonomo di eventuali libri di riferimento in preparazione dell'esame finale o della tesi. Non devono intendersi come materiale ufficiale dell'università Torino - Unito o del prof Di Cunto Ferdinando.

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