Concetti Chiave
- Il TSH è misurato tramite un metodo immunometrico in fase eterogenea, noto come metodo "sandwich", che richiede specifici anticorpi e un enzima tracciante.
- Il processo prevede l'incubazione del campione con particelle di lattice e anticorpi, seguita dalla separazione di anticorpi legati e liberi, con misurazione del segnale luminoso prodotto.
- Interferenze positive possono derivare da anticorpi eterofili che sostituiscono il TSH, mentre interferenze negative si verificano quando tali anticorpi impediscono il legame del TSH all'anticorpo primario.
- T3 e T4 sono prevalentemente legati a proteine plasmatiche, con T4 legato per il 99,98% e T3 per il 99,3%, influenzando la loro misurazione nel sangue.
- La misurazione della frazione libera di T3 e T4 è cruciale, poiché le condizioni patologiche e alcuni farmaci possono alterare i livelli di TBG, falsando la valutazione della funzione tiroidea.
Metodo immunometrico per il TSH
Il TSH viene misurato con metodo immunometrico in fase eterogenea chiamato metodo “sandwich” o anche metodo non competitivo (vedi lezioni precedenti). Per effettuarlo sono necessari:
- anticorpi primari legati a particelle di lattice
- anticorpi secondari legati ad un tracciante
- un enzima tracciante che reagisce con un substrato enzimatico
- TSH (antigene)
Interferenze nel metodo sandwich
Si aggiunge il campione alle particelle di lattice che contengono sulla loro superficie l’anticorpo primario immobilizzato e si fa incubare il campione. Il TSH si lega all’anticorpo primario e, a questo punto, si aggiunge un anticorpo secondario che si lega ad un altro epitopo del TSH (questo anticorpo secondario è legato al tracciante enzimatico). Si lava tutto ciò che non si è legato - da questo il saggio prende il nome di eterogeneo: viene separato l'anticorpo libero dall'anticorpo legato alla fase solida. Si aggiunge un substrato che reagisce con il tracciante enzimatico ed emette il segnale luminoso che si va a misurare. Si possono avere interferenze di tipo positivo e di tipo negativo.
Legame e interferenze degli anticorpi
La presenza di anticorpi eterofili, che possono intromettersi nel legame tra anticorpo primario e secondario, sostituendo il TSH nel legame sandwich, danno interferenze di tipo positivo (dosaggi falsamente aumentati di TSH). Ci possono essere altri anticorpi eterofili che si pongono, invece, di traverso nel legame con anticorpo primario e impediscono al TSH di legarsi, dando un’interferenza di tipo negativo. Queste interferenze vengono testate per i dosaggi messi in commercio, possono essere ridotte ma non eliminate completamente.
Legame di T3 e T4
T3 e T4 sono molecole idrofobiche, presenti in circolo per la maggior parte legate a proteine plasmatiche, in particolare:
- T4 circola legata per il 99,98%, di cui per la maggior parte alla TBG (Tyroxin Binding Globulin), per una percentuale minore alla prealbumina (TBPA) ed all’albumina;
- T3 è legata al 99,3% quasi esclusivamente alla TBG
Misurazione della funzione tiroidea
L’ormone attivo è quello libero, cioè una frazione piccolissima dell’ormone totale che circola nel sangue, tanto che le concentrazioni sieriche sono dell’ordine delle pmol/L sia per FT3 che FT4 (3,2-7,4 pmol/L per FT3 e 10-23 pmol/L per FT4). Altre condizioni patologiche come la cirrosi epatica, la sindrome nefrosica, oppure alcuni farmaci come glucocorticoidi, fenitoina ed eparina possono diminuire la TBG e portare a una sottostima di T4 e T3 senza però che ci sia una vera ipofunzionalità tiroidea. La cosa migliore da fare quindi è misurare la funzione libera degli ormoni tiroidei attraverso i dosaggi immunometrici competitivi.
Domande da interrogazione
- Qual è il principio del metodo immunometrico per la misurazione del TSH?
- Quali interferenze possono influenzare la misurazione del TSH?
- Come circolano T3 e T4 nel sangue?
- Perché è importante misurare la frazione libera di T3 e T4?
Il TSH viene misurato tramite un metodo immunometrico eterogeneo chiamato "sandwich", che utilizza anticorpi primari legati a particelle di lattice e anticorpi secondari legati a un tracciante, per rilevare il TSH nel campione (vedi testo).
Le interferenze possono essere di tipo positivo, causate da anticorpi eterofili che sostituiscono il TSH nel legame, o di tipo negativo, dove altri anticorpi impediscono il legame del TSH. Queste interferenze possono essere ridotte ma non completamente eliminate (vedi testo).
T3 e T4 sono molecole idrofobiche legate per la maggior parte a proteine plasmatiche; T4 circola legata per il 99,98% principalmente alla TBG, mentre T3 è legata al 99,3% quasi esclusivamente alla TBG (vedi testo).
È fondamentale misurare la frazione libera di T3 e T4, poiché l'ormone attivo è solo una piccola frazione dell'ormone totale, e condizioni patologiche o farmaci possono alterare i livelli di TBG, portando a una sottostima senza vera ipofunzionalità tiroidea (vedi testo).
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