Lezioni, Citologia

Citologia

È la scienza che studia la cellula → unità morfologica e fisiologica fondamentale degli organismi e ne possiede tutte le proprietà.

Tipi di cellule

• Procariottica: membrana cellulare + parete cellulare (a volte), RNA a molecola circolare e libera → no nucleo, solo ribosomi.
• Eucariottica: membrana plasmatica, nucleo, organelli.

Composizione

• Acqua 85 %
• Proteine 10 %
• Lipidi 2-3 %
• Carboidrati
• Sol. inorganici
• Acidi nucleici
• DNA 0,4 %
• RNA 0,7 %

Dimensioni

20-30 μm e forma variabile.

Il volume delle cellule è costante per specie veget. e anim. → Legge di Driesch.

La diversa dimensione degli organismi è dovuta al numero → Legge di Ley.

Rapporto tra dimensioni citoplasma e nucleo è costante → Indice nucleoplasmatico.

Metodi di studio

Studio sempre in interfase.

Si può studiare dal punto di vista:

• Biochimico = individua componenti ma non la localizzazione, con centrifugazione.
• Morfologico = osservazione, prelievo t.

Strumenti

• Microscopio ottico (MO) → potere di risoluzione 0,25 μm, sez. da 5-10 μm → microtomo.
• Elettronico a trasmissione (TEM): potere di risoluz. 0,1 nm, sez. 20-40 nm → ultramicrotomo.
• Elettronico a scansione (SEM): potere di risoluz. 10 nm, imm. 3D sezione preparato con metalli pesanti, vongozzati X elettroni.

È ampliata anche microscopia a contrasto di fase e ad interferenza → aumento.

Il contrasto grazie a differenze nell'indice di rifrazione.

Citologia

È la scienza che studia la cellula, unità morfologica e fisiologica fondamentale degli organismi e ne passegge tutte le proprietà.

Tipi di cellule

• Procariottica: no membrana cellulare e parete cellulare (a volte), DNA a molecola circolare e libera - no nucleo, solo ribosomi.
• Eucariotica: membrana plasmatica, nucleo, organelli.

Composizione

• Acqua 85 %
• Proteine 10 %
• Lipidi 2-3 %
• Carboidrati 1 %
• Sali inorganici 1 %
• Acidi nucleici
• DNA 0,2 %
• RNA 0,7 %

Dimensioni

20-30 μm e forma variabile.

Min granulocito 4-5 0,4 μm.

Max cellula uovo 150 μm.

Il volume della cellula è costante per specie uguali. Affini: Legge di Driesch.

La diversa dimensione degli organismi è dovuta al numero: Legge 1. Levy.

Rapporto tra dimensioni citoplasma e nucleo è costante: Indice nucleoplasmatico.

Metodi di studio

Si studiano sempre in interfase.

Li puoi studiare dal punto di vista:

• Biochimico = individua componenti ma non la localizzazione, con centrifugazione.
• Morfologico = osservazione preparati.

Strumenti

• Microscopio ottico (MO) = potere di risoluzione 0,25 μm (5-10 μm).
• Elettronico a trasmissione (TEM): potere di risoluzione 0,4 nm (20-40 nm).
• Elettronico a scansione (SEM): potere di risoluzione 10 nm (3-D e 10 nm; sezione di preparato con metalli, permette di vedere la superficie della cellula e l'immagine è sempre aumentata).

(Usato anche microscopio a contrasto di fase, ad interferenza, e a campo scuro, consente sezionamento e aumento del contrasto grazie a differenze nell'indice di rifrazione).

E infine quello → luce polarizzata → vi hanno sostanze:

• Isotrope → monorifrangenti → disordinate.
• Anisotrope → birifrangenti → ordinate → luce su grani.

Realizzazione di preparati

• Biopsia → prelievo tessuto.
• Fissazione.
• Inclusione.
• Sezionamento.
• Colorazione.

Fissazione

La fissazione può essere:

• Fisica → essiccamento.
• Congelamento → con azoto liquido e acetone (no inclusione) ed molto veloce.
• Chimica → fissativi:
• Coagulanti → rapido; formolo.
• Non coagulanti → meno pronto; quieti.

Inclusione e colorazione

Prima di fare l'inclusione → sezionare bisogna disidratare → si immerge in una serie graduale di soluzioni di alcool e poi si include con:

• Paraffina → l’ottica.
• Resina epossidica → ultraelettronico → fotosferica chiarodroglobe (in soluzione subolica).

Dopo sezionamento si deve colorare con soluzioni acquose → è ogni volta reidratare.

Colorare con coloranti → acidi → sostanze acidofilo acido borico e per disidratare conservare a lungo.

Colorare con coloranti → basici → sostanze basofilo acido acetico.

Tecniche particolari

• Metacromasia.
• Reazione PAS → zuccheri in ros.