Immunologia - interazioni con agenti solubili

1. Interazioni tra Ab e Ag solubili

• 2. Interazioni tra Ab e Ag insolubili
• 3. Reazioni di precipitazione e di flocculazione
• 4. Immunodiffusione doppia (di Ouchterlony) e immunoelettroforesi
• 5. Immunodiffusione radiale (Mancini) e immunoelettroforesi quantitativa (Laurell)
• 6. Reazioni di agglutinazione, di agglutinazione passiva e di inibizione dell’agglutinazione
• 7. Saggi radioimmunologici
• 8. Saggi immunologici coniugati ad enzimi

Interazioni tra Ab e Ag solubili

[Un’importante conseguenza dell’interazione tra Ab e Ag solubile è che si forma precipitato (l’Ag diventa insolubile). Questo meccanismo di precipitazione si usa nella diagnostica per determinare in pazienti la presenza di Ab specifici per l’Ag (sierologia)].

I complessi formati tra Ab monoclonali e i loro antigeni e i complessi formati tra Ab policlonali e apteni sono solubili.

I complessi formati tra Ab policlonali o misture di Ab monoclonali ed Ag di grosse dimensioni portano alla formazione di un precipitato insolubile (le cosiddette reazioni di precipitazione). Tali reazioni possono avvenire sia in un mezzo liquido che in un mezzo semisolido (gel) e entrambi i mezzi sono ampiamente utilizzati in ricerche di laboratorio e in applicazioni pratiche.

La quantità di precipitato che è recuperata quando quantità di Ag sempre crescenti sono aggiunte a una quantità fissa di Ab (zona 1) segue un modello tipico. La quantità di Ab precipitato aumenta con l’aumentare della quantità di Ag fino ad un massimo (zona 2), superato il quale un ulteriore aumento della quantità di Ag comporta una diminuzione della quantità di Ab precipitato (zona 3).

La zona 1 è la cosiddetta zona da eccesso di Ab, la zona 2 è la zona di equivalenza (=rapporto ottimale Ab/Ag); zona 3 è la zona da eccesso di Ag.

Marrack, Heidelberger e Kendall

Perché avviene precipitazione del complesso Ag-Ab? Proposero che i complessi Ag-Ab possono formare aggregati di varie dimensioni e quando il volume di tali aggregati eccede un valore limite avviene precipitazione [il coefficiente di sedimentazione S di una particella è dirett. prop. al suo volume, alla differenza tra la densità sua e la densità del solvente, ed il campo di gravità S = V (r-r0) g ].

Questa teoria (lattice theory) spiega bene i diversi rapporti Ab/Ag e il fatto che gli Ab monoclonali non possono precipitare. Dopo che si è formato il precipitato i suoi complessi ( ) possono dissociarsi e riequilibrarsi, che sono aggregati di Ab!!, con nuovo Ag. Se questo è presente in sufficiente eccesso prevarranno complessi solubili e il precipitato iniziale si dissolverà.