Appunti e esercizi Analisi dei farmaci 3 (III) (voto esame 28)

Analisi del SP-UV/visibile

È una tecnica di assorbimento molecolare. Un fotone viene assorbito da una molecola e questa passa al suo stato eccitato. L'energia del fotone deve essere:

hv = Delta(Ei - Ef)

h = cost. Planck

v = frequenza rad.

Ei - Ef = differenza energia della molecola dallo stato fondamentale a quello eccitato.

La tecnica si basa sulla quantità della luce incidente e trasmessa dalla sostanza, ovvero la differenza tra i 2 valori, che risulta essere proporzionale alla concentrazione del campione secondo la legge di Lambert-Beer.

SP-UV/visibile

È una tecnica di assorbimento molecolare. Un fotone viene assorbito da una molecola e questa passa al suo stato eccitato. L'energia del fotone deve essere:

hv = D(E i - Ef)

h = cost. Planck

v = frequenza rad.

E i - Ef = differenza energia della molecola dallo stato fondamentale a quello eccitato.

La tecnica si basa sulla quantità della luce incidente e trasmessa dalla sostanza, ovvero la differenza tra i 2 valori, che risulta essere proporzionale alla concentrazione del campione secondo la legge di Lambert-Beer.

Log I⁰/I_T = A = ebc

b: misure celle

c = conc campione

e: cost. dell'assorbenza di una sol 1M dell'analita espresso in p/v 100% (1g/100mL)

A = assorbanza misurata.

In farmacocinetica si usa A(1%,1cm) al posto di e.

Il range di lavoro degli strumenti va dai 200 nm ai 700 nm.

Assorbono solo molecole con legami pi coniugati. Questo perché per analizzare molecole con legami pi isolati occorrerebbe più energia e onde con lambda < 200 nm potrebbero rompere i legami, e cioè solventi potrebbero interferire.

Strumentazione

• Lampada al deuterio.
• Monocromatore o policromatore.
• Filtro.
• Campione (cella).
• Rilevatore.

Nel caso sia presente un policromatore si può usare un rivelatore a serie di diodi che consente di analizzare tutto lo spettro in maniera veloce al contrario di un monocromatore che analizza le lunghezze d'onda una per volta.

Un rilevatore a serie di diodi è formato da 200 - 1000 fotodiodi posti su un cristallo di silice. L'analisi può essere condotta a singolo o doppio raggio grazie a uno specchio riflettente. Questo sistema consente l'analisi simultanea del bianco.

Spettroscopia infrarosso

Range (2000-20.000 nm).

La radiazione viene fatta passare attraverso il campione e viene assorbita facendo variare la lunghezza dei legami nella molecola. La lunghezza d'onda della radiazione assorbita è caratteristica del legame che l'assorbe.

Le vibrazioni dovute all'inversione possono essere: stretching, bending.

L'assorbimento è caratterizzato dalla natura polare della molecola.

Solo le molecole con divisione di carica possono assorbire.

C-O>C-Cl>C-N>C-C>H

D'intensità dipende dalla DE, differente elettronegatività.

L'energia vibrazionale è data da

E ~ √(k/m)

k = una costante che dipende dalla forza del legame (singolo, doppio, triplo)

m = m₁ m₂ / (m₁ + m₂)

m₁ = massa atomo 1

m₂ = massa atomo 2

O-H = 16 x 1 / 17 = u = 0,94

Strumentazione IR - dispersivo

Funziona con un monocromatore, il quale permette di analizzare in lunghezza d'onda per volta dopo che ne attraversava il campione.

La sargente II è un fenomeno di Nernst. Il rilevatore è una termo coppia, uno strumento che converte l'energia termica della radiazione in energia elettrica.

Il campione può essere lavorato preventivamente in diversi modi: ridotto in strati sottili di pellicola, portato in filo sospensione e macinato con nujloc, macinato con KBr e "pestigliato".

IR - in FT. 112

Utilizza un interferometro, il quale permette l'analisi simultanea dell'intero spettro.

L'interferometro è costituito da uno specchio semiriflettente, uno specchio fisso e uno mobile. La radiazione viene riflessa e permette contemporaneamente lo specchio semiriflettente. Lo specchio mobile viene meccanicamente spostato al fine di vedere il cammino ottico dell'onda e da creare interferenze di tipo costruttivo e distruttivo. Ovvero permette il passare da una lunghezza d'onda max e una minima, riprendendo l'intero spettro in un'analisi "simultanea".

Schema interferometro

• Specchio fisso.
• Specchio semi-per.
• Specchio mobile.

Ciò che varia al variare di Delta x è il tempo impiegato dall'onda B per tornare indietro. Se arriva in ritardo, si può avere interferenza distruttiva. L'ETF è una tecnica matematica che converte il dominio del tempo a quello della frequenza.

Analisi dei dati raccolti

Gli assorbimenti più facilmente interpretabili si trovano a 1500 m.