Concetti Chiave
- La preparazione del substrato di Violet red bile glucose Agar può avvenire tramite due metodi quantitativi: uno con prodotto liofilizzato e l'altro con campione di latte diluito.
- Il campione di latte viene diluito a 10-3/10-4 e incubato in termostato a 35-38°C per 24 ore per la lettura delle colonie.
- Per il latte da Parmigiano Reggiano, il conteggio dei coliformi deve rimanere tra 10.000 e 50.000 coliformi/ml.
- Si utilizzano piastre pronte con VRGB agar, che accelerano il processo grazie alla loro composizione e alla presenza di un film plastico.
- Durante la lettura, si osserva la formazione di bolle di CO2 attorno alle colonie rosse, utile per il calcolo delle colonie.
Qual è la preparazione del substrato?
È effettuata con due metodi, entrambi quantitativi.
-Preparazione del substrato di Violet red bile glucose Agar, venduto liofilizzato. Nella beuta si mette il quantitativo da etichetta, la si tappa, la si autoclava a 121°C per 15 minuti, poi si porta a 45° in bagnomaria.
- Si usa un campione di latte diluito a 10-3/10-4, si fanno 5 piastre per ogni diluizione. Nella piastra si mette i ml di diluizione e il substrato, che è selettivo grazie alla presenza della bile.
-Incubazione in termostato a 35-38°C per 24 ore.
Lettura e calcolo delle colonie
-Lettura delle piastre, poi si moltiplica il numero di colonie per il fattore di diluizione (come nella CBT).
Per il latte da Parmigiano Reggiano bisogna stare tra i 10000-50000 coliformi/ml.
È più veloce, perché si usano piastre già pronte, con VRGB agar dentro il cartoncino, che è ricoperto da un film plastico composto da polipropilene + tetrazolio.
-Sempre sotto cappa sterile si prendono i campioni diluiti, si solleva il film plastico, si posiziona una goccia sul substrato. Poi si abbassa il film plastico e si sparge uniformemente il campione sul terreno.
-Incubazione a 32°C per 24ore.
-Lettura delle piastre, attorno alle colonie rosse si forma una bolla, costituita dalla CO2. Si moltiplica il numero di colonie per il coefficiente di diluizione.
Domande da interrogazione
- Quali sono i metodi utilizzati per la preparazione del substrato nel processo di analisi del latte?
- Qual è la temperatura e il tempo di incubazione raccomandati per l'analisi delle colonie nel latte?
- Come si calcola il numero di colonie nel latte da Parmigiano Reggiano?
La preparazione del substrato può essere effettuata con due metodi quantitativi: uno prevede l'uso di Violet red bile glucose Agar liofilizzato, autoclave e portato a 45°C, mentre l'altro utilizza un campione di latte diluito e piastre selettive grazie alla bile (come descritto nel testo).
L'incubazione deve avvenire a 35-38°C per 24 ore per il primo metodo, mentre per il metodo con piastre pronte, la temperatura è di 32°C per lo stesso periodo di tempo (come indicato nel testo).
Si legge il numero di colonie sulle piastre e si moltiplica per il fattore di diluizione; per il latte da Parmigiano Reggiano, il numero di coliformi/ml deve rimanere tra 10.000 e 50.000 (secondo le informazioni fornite).
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