Appunti degli studenti per corsi ed esami del Prof. De Andrea Marco

Appunti di Microbiologia - Diagnostica virologica. 1. Principi e tecniche di diagnostica virologica. • Tecniche di analisi virologica diretta: microscopia elettronica (SEM, TEM, Cryo-TEM); microscopia ottica per l'individuazione dell'effetto citopatico (CPE); Rilevazione degli antigeni tramite tecniche immunoistochimichee Western Blot. • Diagnostica molecolare (Nucleic Acid Detection): funzionamento della PCR classica, Real Time PCR e Digital PCR • Virologia quantitativa: coltivazione dei virus ; metodiche di titolazione virale come il Plaque Assay, il Focus Expansion Assay e il concetto di MOI. • Sierologia: Ricerca degli anticorpi nel siero del paziente tramite saggio ELISA . 2. Biologia e replicazione virale generale; • Organizzazione del genoma e classificazione in base alla classificazione di Baltimore (dalla Classe I alla Classe VII). • Struttura e funzioni delle proteine strutturali e non strutturali (es. enzimi replicativi, inibitori dell'immunità innata, oncoproteine). • Proprietà biologiche cellulari: suscettibilità/sensibilità e permissività. • Fasi del ciclo replicativo • Tipologie di infezione nell'ospite: • Meccanismo antivirale dell'interferone e relative strategie di evasione immunitaria dei virus. 3. Trattazione sistematica dei virus umani (virologia speciale) • Classe I (Virus a dsDNA): • Papillomaviridae (HPV): coilocitosi; effetto trasformante oncogeno. prevenzione Epidermodisplasia Verruciforme • Polyomaviridae: Virus BK ; Virus JC; Merkel Cell Polyomavirus, • Adenoviridae: Mastadenovirus; struttura; ciclo replicativo, uso biotecnologico come vettori virali per terapia genica e oncologia. • Poxviridae: Virus del Vaiolo (Smallpox) e Monkeypox • Herpesviridae: suddivisione in Alpha Beta e Gamma, cascata trascrizionale e siti di latenza ; manifestazioni cliniche correlate, Mononucleosi infettiva, Linfoma di Burkitt, Sarcoma di Kaposi, retiniti; farmaci anti-erpetici • Classe II (Virus a ssDNA): • Parvoviridae e Circoviridae: Torque Teno Virus ; Parvovirus B19 ; Virus Adeno-Associati (AAV) utilizzati come vettori virali non patogeni ad espressione stabile. • Classe III (Virus a dsRNA): • Reoviridae (Rotavirus); patogenesi della gastroenterite pediatrica acuta. • Classe IV (Virus a ssRNA+): • Picornaviridae; genere Rhinovirus (; Coxsackievirus ; Poliovirus- • Togaviridae: Struttura a toga; Alphavirus ; Rubivirus. • Flaviviridae: Virus West Nile,, Dengue e Zika Virus • Coronaviridae: test di neutralizzazione con pseudovirus VSV e vaccini a mRNA). • Classe V (Virus a ssRNA-): • Orthomyxoviridae (Virus Influenzali):tipi A, B e C; struttura ; legame con l'acido sialico; meccanismi di variabilità genetica ; farmaci inibitori; composizione del vaccino stagionale . • Paramyxoviridae: Caratteristiche differenziali ; generi Respirovirus e Rubulavirus ; Morbillivirus, Virus della Parotite; Pneumovirus • Rhabdoviridae: Virus della Rabbia (trasmissione zoonotica tramite saliva di animali infetti); • Classe VI (Retrovirus): • Retroviridae: Struttura genomica diploide a ssRNA+; suddivisione in Orthoretrovirinae (Lentivirus e Deltaretrovirus) e Spumaretrovirinae; • Classe VII e Gruppo Speciale (Virus dell'Epatite): • Inquadramento clinico e patogenesi epatica: ittero; differenze tra epatite acuta ed epatite cronica/persistente con evoluzione in cirrosi epatica ed adenocarcinoma primario (epatocarcinoma/HCC). • HCV (Classe IV): • HBV (Classe VII - Hepadnaviridae): Struttura, patogenesi immunomediata; interpretazione dei marcatori sierologici per distinguere infezione; prevenzione (vaccino ricombinante HBsAg). • HDV (Virus Epatite D): Classificato come viroide a ssRNAcircolare.