Tossicologia e mutagenesi ambientale - Appunti Lezione 10

Ricombinazione omologa

Reciproca e non reciproca

Crossing-over – Ricombinazione intergenica tra 2 loci genici:

• Tra il centromero ed un locus genico
• Scambio dei marcatori (non sempre)

Conversione genica – Ricombinazione intragenica tra 2 siti mutati di un locus genico (correzione del malappaiamento)

Crossing-over

Introduzione DSB in un omologo

• Resezione a dare estremità 3’OH libere
• Invasione dell’omologo intatto da parte di un’elica e formazione ansa D
• Nuova sintesi di DNA su stampo ansa D ed estensione dell’ansa
• Appaiamento con l’elica che non aveva invaso
• Nuova sintesi e saldatura dei frammenti → doppia HJ
• Risoluzione della struttura

Risoluzione giunzione di Holliday

Modalità di taglio della HJ:

• Taglio nord-sud (verticale al chiasma) – scambio dei marcatori esterni
• Scambio dei marcatori esterni con conversione genica (correzione del malappaiamento)
• Taglio est-ovest (orizzontale al chiasma) – non c’è scambio dei marcatori esterni
• Conversione genica

Concordanza tagli (N-S + N-S o E-O + E-O) – prodotti ricombinanti

Tagli discordanti (N-S + E-O) – prodotti non ricombinanti

Combinazione con o senza crossing-over

• Crossing-over A b C A b C A b C a B c a B c a B c
• No crossing-over A b C A B c A B c a b C a b C a B c a B c

Conversione genica

• A b C bA C B b a c B a B c A b C A b C b A C A C B a c a c b B a B c a c B A b C A b C a b c a B c a B c Saccharomices cerevisiae

Saccharomices cerevisiae

12 Mb 16 cromosomi + 1 DNA mitocondriale

• Fase aploide
• Fase diploide

Saccharomices cerevisiae D7

• ilv1-92 Cromosoma V ilv1-92 trp5-12 +
• Cromosoma VII trp5-27+ ade2-40 +
• Cromosoma XV + ade2-119 Wild type: colonie bianche

Ricombinazione mitotica

• ade2-40 + ade2-40 + ade2-119+ ade2-119+
• Colonie bianche Colonie rosse ade2-40 + p ade2-40 + r ade2-40 + ade2-119+ ade2-40 + ade2-119+ r p ade2-119+ ade2-119+
• Colonie rosa Conversione genica trp5-12 + trp5-12 + trp5-12 + trp5-27+ trp5-27+ trp5-27+
• Colonie trp- trp5-27+ trp5-12 + ++ + Colonie trp+ → conversione 5-12 + trp5-27+ trp5-12 + trp5-27+ trp5-27+A GG G C