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Cellula epatica albumina

actina miosina

NUCLEO

trascrizione

mRNA actina actina

traduzione

mRNA albumina albumina CITOPLASMA

Cellula nervosa albumina miosina

actina NUCLEO

trascrizione actina

mRNA actina traduzione acetilcolina esterasi

mRNA acetilcolina esterasi CITOPLASMA

Actina: subunità monomerica dei microfilamenti citoscheletrici

Acetilcolina esterasi: enzima che idrolizza il neurotrasmettitore acetilcolina

Albumina: mantenimento dell’equilibrio idrico

ESTRAZIONE ACIDI NUCLEICI (DNA-RNA)

Possibili fonti:

- Tessuto (omogenizzazione)

- Coltura di cellule eucariotiche (su piastra o in sospensione)

- Coltura di cellule batteriche (in sospensione)

Raccolta delle cellule mediante centrifugazione

LISI CELLULARE

LISOZIMA:(albume, lacrime) rompe le pareti batterica per digestione enzimatica

EDTA: chela gli ioni divalenti destabilizzando le pareti ed inattivando le DNasi.

Polare Apolare

SDS

SDS: detergente ionico che destruttura le membrane cellulari

MISCELA COMPLESSA Trattamento opzionale con:

- DNA - RNasi (enzima termostabile), distrugge l’RNA

- RNA - Proteasi K, distrugge le proteine

- PROTEINE

- LIPIDI

- CARBOIDRATI

FENOLO/CLOROFORMIO

(FARE UN FENOLO)

FENOLO: liquido che non si miscela con l’acqua

CLOROFORMIO: aiuta il fenolo nella separazione dall’acqua

agitazione e

centrifugazione Fase acquosa

Soluzione Fenolo

acquosa proteine Fase organica

PRECIPITAZIONE A FREDDO CON ALCOL E SALI interazione

elettrostatiche

Acidi nucleici H O

2

Sali: i cationi interagendo con i gruppi

ne neutralizzano la carica diminuendo

l’idrofilicità della molecola

Alcol: ha una costante dielettrica inferiore

dell’acqua, agevolando l’interazione

tra i cationi ed i gruppi fosfato

Temperatura: agevola la precipitazione

PRECIPITAZIONE A FREDDO CON ALCOL E SALI

- Na + - ETANOLO (2,5 volumi della soluzione acquosa)

- K + oppure

- NH 4+ - ISOPROPANOLO (0,6 volumi della soluzione acquosa)

- Li (per RNA)

+ Liberazione sicura dal fenolo e concentrazione del campione

PRECIPITAZIONE A FREDDO CON ALCOL E SALI

+ Allontanamento

centrifugazione supernatante

etanolo 70%

centrifugazione e risospensione

allontanamento in acqua o TE

supernatante


PAGINE

9

PESO

872.24 KB

AUTORE

flaviael

PUBBLICATO

+1 anno fa


DETTAGLI
Corso di laurea: Corso di laurea magistrale a ciclo unico di medicina
SSD:
Università: Bologna - Unibo
A.A.: 2008-2009

I contenuti di questa pagina costituiscono rielaborazioni personali del Publisher flaviael di informazioni apprese con la frequenza delle lezioni di Biologia molecolare e studio autonomo di eventuali libri di riferimento in preparazione dell'esame finale o della tesi. Non devono intendersi come materiale ufficiale dell'università Bologna - Unibo o del prof Ventura Carlo.

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