Esperimenti di laboratorio per valutare l'efficacia dei disinfettanti

Materiali e strumenti

Scopo: Individuare il potere disinfettante di diverse sostanze.

Materiali/Strumenti:

• 2 Beute da 250 ml con tappo;

• Bilancia tecnica;

• Piastra riscaldante;

• Becco Bunsen;

• 13 Provette con tappo e portaprovette;

• 13 Piastre Petri;

• Campanelle di Dhuram (per verificare la formazione di gas);

• Scotch di carta;

• Cotton Fioc sterili;

• Ansa;

• Vetrini con vetrini copri oggetti;

• Timer;

• Microscopio.

Sostanze/reagenti:

• Terreno Nutrient Broth;

• Terreno TSA Agar;

• Acqua distillata;

• Alcol;

• Candeggina;

• Disinfettante;

• Violetto di Genziana;

• Lugol;

• Safranina.

Procedimento:

1.

Preparazione del terreno

Prelevare 1.20 grammi di NT (Nutrient Broth) e inserirli in una beuta da 250 ml;

2. Aggiungere 150 ml di Acqua distillata e agitare;

3. Mettere la beuta in Autoclave.

1.

Prelevare 11.50 grammi di TSA Agar e inserirli in una Beuta da 250 ml;

2. Aggiungere 250 ml di Acqua distillata;

3. Riscaldare il terreno con la piastra riscaldante portandolo ad ebollizione per almeno tre volte (ebollizione circa 60/70°);

4. Mettere in autoclave.

1.

Sterilizzazione e semina

Accendere il Becco Bunsen per lavorare in sterilità;

2. Riscaldare il terreno TSA Agar in modo che sia un po’ liquido e quindi possibile da seminare;

3. Prendere 13 piastre e seminare il terrreno TSA Agar, aspettare che si solidifichi;

4. Prendere il terreno Nutrient Broth e inserirne 9 ml in ognuna delle 13 provette;

5. Aggiungere alle provette la Campanella di Dhuram.

1. Dividere il bancone in 12 spazi con dello scotch di carta;

Alcool:

2.

Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 60 secondi nell’alcol;

3. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

4. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

5. Flambare il bordo della provetta 1 e immergere all’interno il cotton fioc;

6. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 120 secondi nell’alcol;

7. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

8. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

9. Flambare il bordo della provetta 5 e immergere all’interno il cotton fioc;

10. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 240 secondi nell’alcol;

11. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

12. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

13. Flambare il bordo della provetta 9 e immergere all’interno il cotton fioc;

Candeggina:

1. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 60 secondi nella candeggina;

2. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

3. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

4. Flambare il bordo della provetta 2 e immergere all’interno il cotton fioc;

5. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 120 secondi nella candeggina;

6. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

7. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

8. Flambare il bordo della provetta 6 e immergere all’interno il cotton fioc;

9. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 240 secondi nella candeggina;

10. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

11. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

12. Flambare il bordo della provetta 10 e immergere all’interno il cotton fioc;

Disinfettante:

1. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 60 secondi nel disinfettante;

2. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

3. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

4. Flambare il bordo della provetta 3 e immergere all’interno il cotton fioc;

5. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 120 secondi nel disinfettante;

6. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

7. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

8. Flambare il bordo della provetta 7 e immergere all’interno il cotton fioc;

9. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 240 secondi nel disinfettante;

10. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

11. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

12. Flambare il bordo della provetta 11 e immergere all’interno il cotton fioc;

Acqua:

1. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 60 secondi nell’acqua;

2. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

3. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

4. Flambare il bordo della provetta 4 e immergere all’interno il cotton fioc;

5. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 120 secondi nell’acqua;

6. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

7. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

8. Flambare il bordo della provetta 8 e immergere all’interno il cotton fioc;

9. Prendere un cotton fioc sterile e immergerlo per 240 secondi nell’acqua;

10. Passare il cotton fioc nel primo spazio del bancone;

11. Seminare con il cotton fioc sulla piastra contrassegnata con l’apposito numero;

12. Flambare il bordo della provetta 12 e immergere all’interno il cotton fioc;

Osservazione e colorazione di Gram

Tenere una piastra e una provetta contenenti terreno come indicatore, quindi senza seminare nulla.

Osservare e descrivere il contenuto delle provette e delle piastre a distanza di una settimana.

Per osservare meglio alcune colonie di batteri presenti in alcune piastre effettuiamo la colorazione di Gram:

1. Sterilizzare un’ansa con il Becco Bunsen;

2. Strisciare l’ansa su una colonna;

3. Mettere una goccia d’acqua distillata su un vetrino;

4. Seminare con l’ansa la parte di colonia prelevata e far asciugare;

5. Aggiungere il Violetto di Genziana e lasciarlo agire per 2 minuti;

6. Rimuovere l’eccesso di colore senza lavare;

7. Aggiungere il Lugol e lasciarlo agire per 2 minuti;

8. Rimuovere l’eccesso di colore, senza lavare;

9. Lavare con alcol per far scendere i residui rimasti di colorante;

10. Sciacquare con acqua distillata il vetrino;

11. Aggiungere La Safranina e lasciarla agire per 30 secondi;

12. Sciacquare con acqua distillata;

13. Coprire con il vetrino copri oggetti;

14. Osservare con il microscopio.

Osservare e commentare i risultati ottenuti.