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Metodi di conta

microbica

esistono differenti metodiche per la

determinazione quantitativa dei microrganismi

tecniche colturali e non colturali

 conta diretta ed indiretta

 il tipo di microrganismo/i ed il tipo di campione

possono necessitare di specifiche tecniche

Conta in piastra

Si basa sulla produzione di colonie microbiche, a

 partire da singole cellule, su terreni agarizzati

Unità formanti colonia = UFC

 Le cellule devono essere vive e vitali (viable cell

 count)

Il terreno deve essere appropriato al tipo di

 conta

Fase critica: preparazione del campione

 Preparazione del campione

Stato fisico del campione (solido, liquido, ecc.)

 Prelievo e trasporto del campione (sterilità e

 tempi)

Rappresentatività del campione

 Uso del mixer o dello stomacher

 Uso delle diluizioni seriali

 diluizioni

diluizioni

Semina in piastra

Conta in piastra

Si contano le piastre con 20-200/30-300 colonie

 Si moltiplica il numero delle colonie contare per

 l’inverso del fattore di diluizione

Si riporta tutto al ml o g di campione

 È preferibile operare la semina in doppio o in

 triplo per aumentare la precisione

Conta in piastra

Sistema alternativo:

 N= ΣC _

.

V(n + 0,1n ) d

1 2

ΣC = somma delle colonie nelle piastre considerate

V = volume dell’inoculo seminato

n = numero delle piastre considerate, per la prima diluizione

1

n = numero di piastre considerate, per la seconda diluizione

2

d = fattore di diluizione corrispondente alla prima diluizione

esempio

Volume inoculo 1,0 ml

-2

Prima diluizione 10 : 168 e 215 colonie

-3

Seconda diluizione 10 : 14 e 25 colonie

N = 168 + 215 + 14 + 25 = 422 = 19812

1 X [(1x2) + (0,1 x 2)] x 0,01 0,022

4

19812 = 1,9 x 10 UFC/g-ml

Sensibilità della metodica

Qual è la concentrazione limite che posso

 determinare?

Se non ho nessuna colonia in piastra, come

 esprimo il risultato?

Quante diluizioni devo fare?

 Pregi e difetti

Tecnica versatile e relativamente economica

 Permette di contare le sole cellule vive e vitali

 Si può selezionare il terreno per contare solo specifici

 microrganismi

Utile per campioni a concentrazione microbica medio-

 alta

Poco sensibile

 Non tiene conto dei VBNC

 Richiede molto tempo (almeno 24h)


PAGINE

25

PESO

5.62 MB

AUTORE

kalamaj

PUBBLICATO

+1 anno fa


DETTAGLI
Esame: Microbiologia
Corso di laurea: Corso di laurea magistrale in medicina e chirurgia (a ciclo unico - 6 anni)
SSD:
Università: Foggia - Unifg
A.A.: 2012-2013

I contenuti di questa pagina costituiscono rielaborazioni personali del Publisher kalamaj di informazioni apprese con la frequenza delle lezioni di Microbiologia e studio autonomo di eventuali libri di riferimento in preparazione dell'esame finale o della tesi. Non devono intendersi come materiale ufficiale dell'università Foggia - Unifg o del prof Massa Salvatore.

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