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ESPERIENZA DI CINETICA ENZIMATICA

DETERMINAZIONE DELL'ATTIVITÀ DELLA FOSFATASI ALCALINA

.

PROCEDIMENTO:

4-nitrofenilfosfato 4-nitrofenolato

Per la determinazione dell'attività fosfatasica si misura spettrofotometricamente

alla lunghezza d'onda di 400 nm la quantità di 4-nitrofenilfosfato che si forma nel

corso della reazione, in una miscela con la composizione sottoriportata a cui viene

aggiunta una quantità di campione contenente fosfatasi alcalina.

reagente ml aggiunti ml aggiunti ml aggiunti

Tris-HCl 0.2M, pH 8 0,75 0.75 0.75

4-nitrofenilfosfato 0.02 M 0,15 (2 mM) 0.075 (1 mM) 0.040 0.5 mM

H O 0.55 0.625 0.660

2

campione 0.05 0.05 0.05

Accendere lo spettrofotometro o il colorimetro e impostare la lunghezza d’onda di

400 nm.

Preparare le cuvette con le soluzioni come riportato in tabella e lasciare

equilibrare per qualche minuto a 20°C

Posizionare la cuvetta nello spettrofotometro, aggiungere il campione (50

microlitri), mescolare aiutandosi con una pipetta in vetro, fare l’autozero.

Seguire la reazione per 5 minuti.

Calcolare l'incremento di assorbimento per minuto di reazione quindi le unità

internazionali di enzima (U) espresse in µmoli/min usando la relazione riportata di

seguito: U = µmoli/min = [(∆E/min)/1E] * Volume test (ml)


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AUTORE

Atreyu

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+1 anno fa


DESCRIZIONE DISPENSA

Il corso si interessa di studiare i seguenti argomenti. E' tenuto dal prof Nicola Franceschini
Attività di laboratorio.
1. Deteminazione concentrazione proteica: metodo Bradford e misure di assobimento a 280 nm
2. Determinazione attività enzimatica: fosfatasi, determinazione Km e Vmax
3. Tecniche elettroforetiche: SDS-PAGE, western blot, zimografia (determinazione peso molecolare macromolecole)


DETTAGLI
Corso di laurea: Corso di laurea in biotecnologie
SSD:
Università: L'Aquila - Univaq
A.A.: 2011-2012

I contenuti di questa pagina costituiscono rielaborazioni personali del Publisher Atreyu di informazioni apprese con la frequenza delle lezioni di TECNICHE DI LABORATORIO BIOMEDICO e studio autonomo di eventuali libri di riferimento in preparazione dell'esame finale o della tesi. Non devono intendersi come materiale ufficiale dell'università L'Aquila - Univaq o del prof Franceschini Nicola.

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